RNA是核糖核酸,，DNA是脫氧核酸,。區(qū)別：紫外吸收：核酸的λm＝260nm，堿基展開(kāi)程度越大,，紫外吸收就越厲害,。當(dāng)A＝1時(shí),，DNA：50ug/ml，RNA和單鏈DNA：40ug/ml,，寡核苷酸：20ug/ml,。用A260/A280還可來(lái)表示核酸的純度。沉降速度：對(duì)于拓?fù)洚悩?gòu)體（核苷酸數(shù)目相同的核酸）,，其沉降速度從達(dá)到小依次為：RNA;超螺旋DNA>解鏈環(huán)狀DNA;松弛環(huán)狀DNA;線形DNA也就是在離心管中較上層是線形DNA,，較下面是RNA。電泳：核苷酸,、核酸均可以進(jìn)行電泳,，泳動(dòng)速度主要由分子大小來(lái)決定，因此,，電泳是測(cè)定核酸分子量的好方法,。DNA分子量測(cè)定較直接的方法：用適當(dāng)濃度的EB（溴嘧啶）染色DNA，可以將其他形式的DNA變成線形DNA,，用電鏡測(cè)出其長(zhǎng)度,，按B-DNA模型算出bp數(shù)，根據(jù)核苷酸的平均分子量就可計(jì)算出DNA的分子量,。好的試劑盒價(jià)格比較貴,，在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來(lái)定奪試劑盒的使用。寧波鄭州RNA提取試劑

RNA提取關(guān)鍵點(diǎn)病菌RNA在提取后也仍然具有傳染性,，在提取時(shí),，實(shí)驗(yàn)人員需要佩戴口罩和手套等各種防護(hù)裝備，以防實(shí)驗(yàn)室污染,。而有種「自動(dòng)滅活」的方法,，在更加便利的同時(shí)，也能更好的保護(hù)實(shí)驗(yàn)人員的安全,。許多樣品中含有高水平的RNase,，這種酶也會(huì)加速RNA的降解。為了使這種酶對(duì)降解的影響較小化,，較好在采集時(shí)就穩(wěn)定好樣本中的RNA,。這種情況下，可以在裂解緩沖液中立即進(jìn)行溶解,。比如可以通過(guò)TRIzol?,、RNA裂解緩沖液等使RNase失活，然后再處理樣本,。另外,，再采集樣本之后馬上加入DNA/RNAShield，可以快速降解掉RNase等蛋白物質(zhì),。當(dāng)然,，DNA/RNAShield也會(huì)保證取樣時(shí)微生物基因多樣性不會(huì)發(fā)生改變,。合肥RNA提取試劑供應(yīng)商常用RNA提取方法有：1TRIzol法；2TRIzol+過(guò)柱法,；3CTAB+過(guò)柱法,；4試劑盒法。

總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出,。例如,，從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8,。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,，28S的位置大約在2kb，18S大約在1kb的位置,，不同濃度的凝膠位置變化較大,。注意事項(xiàng)：樣品用總RNA提取試劑勻漿后，如果不即刻加入氯仿之前,，置于-70°C下可放置一個(gè)月以上,。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,，2-8°C可以保存一周,，-20°C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,，容易降解,，建議提取后盡快進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如反轉(zhuǎn)錄成cDNA,，NorthernBlot等

提取RNA的詳細(xì)步驟：首先,，將研缽晾干夠，倒入1/3體積的液氮,，加入0.2g均質(zhì)的植物材料,，充分研磨后轉(zhuǎn)入一個(gè)含有300微升GMT的1.5ml的離心管中，搖勻,。然后,，加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻，加入300微升酸酚搖勻,，加入100微升的氯仿?lián)u勻,。然后，在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,，吸取上清液的3/4,，加入等體積的異丙醇,，于冰上放置十五分鐘。然后,，在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,，將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中，于-20攝氏度下放置過(guò)夜,。然后,，在4攝氏度13000r/min下離心10-15min，將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,，加入1/2體積氯仿和1/2體積酸酚,，搖勻，進(jìn)行抽提,，在4攝氏度13000r/min下離心五分鐘,。將上清液中加入等體積的氯仿?lián)u勻，進(jìn)行抽提,，在四攝氏度13000r/min下離心五分鐘,，上清液中加入1/10體積3mol/lNaAc和兩倍體積的午睡乙醇與-20攝氏度放置一小時(shí)。優(yōu)化的洗滌劑和離液鹽用于裂解細(xì)胞并滅活核糖核酸酶,。

將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,，加入50～100μLRNA洗脫液，室溫放置1～2分鐘,。12000rmp室溫離心半分鐘,，離心管中溶液即為RNA樣品,，可以立即使用或存放于-80℃待用。昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒使用方法：將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,，12000rmp室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,，12000rmp室溫離心半分鐘,，棄穿透液,。加0.7mL通用洗柱液,，室溫12000rmp離心半分鐘，棄穿透液,。加0.3mL通用洗柱液,，室溫12000rmp離心半分鐘，棄穿透液,。此步可以省略,。室溫12000rmp離心半分鐘,。此步十分重要,，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。若比值較低,，說(shuō)明有殘余蛋白質(zhì)存在,；比值太高,，則提示RNA有降解,。蕪湖正規(guī)RNA提取試劑廠家現(xiàn)貨

在裂解液上游加入酶裂解步驟（如蛋白酶 K,、溶菌酶等）。寧波鄭州RNA提取試劑

RNA提取注意事項(xiàng)：1,、組織樣本要盡可能的新鮮，避免反復(fù)凍融,。2、提取時(shí)組織要充分研磨,，組織量不宜過(guò)少,，更不宜過(guò)多,。3、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間,，使樣本充分裂解。4,、在用Trizol法提取時(shí)，分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,，不能多吸”,，千萬(wàn)不能提取到中間層,，否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染,。5,、洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤(rùn)到管壁的四周,，確保洗滌徹底。6,、柱式提取法,，洗滌完后除了對(duì)柱子進(jìn)行空離后，還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)5~10min,，使有機(jī)溶劑充分揮發(fā)干,。7、柱式法較后洗脫時(shí)候,，當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5min,，或者提前將DEPC水加熱至60℃，可提高洗脫得率,。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀,，則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時(shí)間，并用泵頭不斷吹吸離心管底部,。寧波鄭州RNA提取試劑