糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來(lái)顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨,、垂體、霉菌,、色素,、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等,。過(guò)碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色,。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),,使用時(shí)應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過(guò)氧化,,這是很關(guān)鍵的步驟,。PAS技術(shù)是很少可檢測(cè)不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原,。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟,。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來(lái)催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去,。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,,不主張應(yīng)用唾液,。多糖主要指糖原,它是一種膠樣液態(tài)存在于肝細(xì)胞,、骨骼肌,、心肌等處。江蘇糖原染色試劑盒直銷價(jià)
糖原染色試劑盒,。含乙二醇基的多糖經(jīng)過(guò)碘酸氧化,,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無(wú)色品紅結(jié)合,,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中,。該反應(yīng)稱為碘酸-雪夫(PAS)反應(yīng)。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,,冷卻60℃時(shí)過(guò)濾,,加1mmol/L鹽酸20ml,,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,,混合后放棕色瓶中,,置暗處24h,無(wú)色即可放冰箱中保存,,呈微紅色,,則加活性炭1~2g,吸附過(guò)濾使成無(wú)色液體,,放冰箱中保存,。若溶液變紅,即不能再用,。(2)10g/L過(guò)碘酸水溶液:過(guò)碘酸(HIO4·2H2O)1g,加蒸餾水至10ml,。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個(gè)月,,變黃則失效浙江糖原染色試劑盒廠家現(xiàn)貨糖原的染色在臨床病理診斷上具有重要意義,。
糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蠟切片脫蠟至水。(2)0.5%過(guò)碘酸水溶液5分鐘,?;?%過(guò)碘酸95%酒精溶液(過(guò)碘酸再結(jié)晶應(yīng)重新配制使用)。(3)蒸餾水洗,,70%酒精洗,。(4)Schiff氏液15-30分鐘。(Schiff氏液從冰箱取出升至室溫使用)(5)流水沖洗10分鐘,。(6)蘇木素浸染細(xì)胞核2-3分鐘,。(7)脫水、透明,、封蓋,。結(jié)果:糖原呈紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色,。試劑配制:(1)0.5%過(guò)碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液,。(2)Schiff氏試劑。堿性品紅1g蒸餾水200ml1N鹽酸(98.3ml比重1.16鹽酸,,加入蒸餾水成1000ml)20ml偏重亞硫酸鈉或鉀1g堿性品紅1g加入200ml蒸餾水,,攪拌加熱沸騰,待冷卻至50℃過(guò)濾,,加入當(dāng)量鹽酸至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉,。置于暗處,兩天后溶液變桔黃色或草黃色,然后加入少量活性碳并震蕩,、過(guò)濾,,此時(shí)溶液應(yīng)為無(wú)色。保存冰箱備用,。溶液如顯淺紅色或草黃色,,染色效果較差。
試劑盒:JC-1是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)熒光染料,,可作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑,。JC-10染料是JC-1染料的升級(jí),有著更很好的水溶性以及染料穩(wěn)定性,。原理:JC-1染料在正常細(xì)胞內(nèi)聚集在線粒體內(nèi),,形成多聚體,發(fā)紅色熒光,;而在凋亡細(xì)胞內(nèi),,由于線粒體膜電位的破壞,不能聚集到線粒體內(nèi),,以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光,。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài),在低濃度時(shí)以單體的形式存在,,高濃度時(shí)以多聚體形式存在,,兩者的發(fā)射光譜不同,但均可在流式細(xì)胞儀綠色(FL-1)通道檢測(cè)出綠色熒光,,JC-1可透過(guò)正常細(xì)胞膜以單體狀態(tài)聚集胞內(nèi),。將動(dòng)物殺死后迅速取出所需要的組織。
糖原染色(PAS):(1)原理:過(guò)碘酸將血細(xì)胞內(nèi)的糖原氧化,,生成醛基,。醛基與雪夫液中的無(wú)色品紅結(jié)合,形成紫色化合物,,定位于細(xì)胞質(zhì)中。(2)操作方法:干燥涂片,,滴加甲醛固定液固定10分鐘,,流水沖洗,晾干,。滴加過(guò)碘酸溶液作用20分鐘,,流水沖洗,晾干,。滴加雪夫液作用60分鐘,,流水沖洗,晾干。滴加甲基綠溶液復(fù)染10分鐘,,流水沖洗,,晾干鏡檢。(4)臨床意義:根據(jù)染色陽(yáng)性程度和陽(yáng)性物形態(tài)鑒別主要用于急性淋巴細(xì)胞白血病和急性非淋巴細(xì)胞白血病鑒別,,還有助于紅白血病與巨幼細(xì)胞貧血和溶血性貧血的鑒別診斷,。取材必須新鮮,這一點(diǎn)對(duì)于從事細(xì)胞生物學(xué)研究尤為重要,。品質(zhì)好的糖原染色試劑盒產(chǎn)品介紹
可將胰酶消化后細(xì)胞的保存在含2%BSA的PBS中,,防止進(jìn)一步的損傷。江蘇糖原染色試劑盒直銷價(jià)
特染的應(yīng)用價(jià)值:現(xiàn)代病理學(xué)中免疫組織化學(xué)技術(shù),、電子顯微鏡技術(shù)以及其它細(xì)胞及分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用日益普遍,,但由于這些技術(shù)要求一定的實(shí)驗(yàn)條件以及所需的試劑價(jià)格較為昂貴,對(duì)于一部分病人以及某一些基層醫(yī)院是比較難以接受的,。而組織化學(xué)技術(shù)則具有無(wú)需復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)條件以及較為昂貴的試劑操作又比較簡(jiǎn)單的優(yōu)勢(shì),,在臨床病理學(xué)診斷中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。比如,,當(dāng)細(xì)胞中出現(xiàn)色素,,是黑色素還是含鐵血黃素以及當(dāng)組織中出現(xiàn)均一化學(xué)物質(zhì)是否為淀粉樣變性等,用組織化學(xué)技術(shù)區(qū)別起來(lái)很簡(jiǎn)單,,所以組織化學(xué)技術(shù),,雖然已有幾十年到幾百年的歷史,仍是一個(gè)很有實(shí)用價(jià)值的技術(shù),。江蘇糖原染色試劑盒直銷價(jià)
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