外泌體的提取,、分離方法：免疫親和層析法。免疫親和層析法是利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法,，主要用于生物大分子的分離,、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,，如TSG101或四跨膜蛋白,。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合，只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識(shí)別,，這使得提取的外泌體純度高,，但是產(chǎn)量低。Zarovni等分別用超速離心,、密度梯度離心和免疫層析法,，從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白，結(jié)果表明,，免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix、CD9,、CD63),，同時(shí)，ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性,。外泌體提?。河糜诰酆衔锍恋淼妮^常見(jiàn)聚合物之一是聚乙二醇（PEG）。鄭州外泌體提取試劑平均價(jià)格

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高、操作難度大,。李記生物自主開(kāi)發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,，組分經(jīng)過(guò)優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、血清,、血漿、尿液及其他體液（腦脊液,、腹水,、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取,，并搭配純化過(guò)濾裝置,，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項(xiàng)：1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過(guò)大時(shí),，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理,。2.當(dāng)血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,，收獲的外泌體顆粒無(wú)法通過(guò)EPF柱純化時(shí),，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過(guò)EPF柱離心。3.針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白（CD63,CD9,CD81等）進(jìn)行Westernblot檢測(cè),，可以鑒定所提的外泌體,。通過(guò)超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量。武漢正規(guī)外泌體提取試劑廠(chǎng)家現(xiàn)貨它普遍存在并分布于各種體液中,，攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子,。

外泌體研究的主要應(yīng)用：外泌體的功能取決于其所來(lái)源的細(xì)胞類(lèi)型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈,、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化,、一些病癥侵襲等方方面面,。有研究表明一些病癥來(lái)源的外泌體參與到一些病癥細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成,，促進(jìn)了一些病癥的生長(zhǎng)與侵襲,。一些病癥。一些病癥轉(zhuǎn)移,。來(lái)自白血病干細(xì)胞的外泌體促進(jìn)急性骨髓性白血?。ˋML）細(xì)胞的增殖、遷移和壓制細(xì)胞凋亡,。治病靶標(biāo),。利用外泌體遞送小干擾RNA來(lái)沉默KRASG12D，從而特異性高效靶向至胰腺病細(xì)胞,，以明顯降低RAS活化,、病細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移過(guò)程。免疫,。β細(xì)胞將含有蛋白質(zhì)和miRNA的外泌體釋放到細(xì)胞外,，并可轉(zhuǎn)移到其他代謝部位或免疫內(nèi)皮細(xì)胞，有利于維持葡萄糖體內(nèi)平衡或造成胰島素抵抗,。心血管,。外泌體介導(dǎo)miR-155從平滑肌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到內(nèi)皮細(xì)胞導(dǎo)致了內(nèi)皮細(xì)胞的損傷促進(jìn)動(dòng)脈硬化。分子標(biāo)記,。疾病診斷,。在酒精性肝病、NASH,、菌類(lèi)性肝炎,、藥物性肝損傷和肝細(xì)胞病中發(fā)現(xiàn)循環(huán)EVs的水平上升,。預(yù)后標(biāo)志。

外泌體提?。?,、過(guò)濾。超濾膜也可用于分離外泌體,。根據(jù)外泌體的大小,，從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見(jiàn)的過(guò)濾膜具有0.8μm,、0.45μm或0.22μm的孔徑,，可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體,，也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體：不過(guò),，該方法由于過(guò)濾膜的粘附，可能會(huì)損失外泌體,，并且過(guò)濾時(shí)的壓力和剪切力,，可能會(huì)使外泌體變形受損。2,、基于聚合物的沉淀技術(shù),。基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,，在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見(jiàn)聚合物之一是聚乙二醇（PEG）,。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn),，包括對(duì)分離的外泌體影響小、pH中性等,。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法,。然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物（包括脂蛋白）而且，聚合物材料的混雜可能會(huì)影響下游分析來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。

當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸,、脂類(lèi)等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,，進(jìn)而啟動(dòng)靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,，從而啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路,。有報(bào)道稱(chēng)一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì),、mRNA以及microRNA。人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,，包括內(nèi)皮細(xì)胞,、免疫細(xì)胞、血小板,、平滑肌細(xì)胞等,。此提取方法條件復(fù)雜，成本高,。鄭州外泌體提取試劑廠(chǎng)家批發(fā)價(jià)

用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：抽血技巧,。鄭州外泌體提取試劑平均價(jià)格

所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中,，包括血液,、唾液、尿液,、腦脊液和乳汁中,。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,，參與細(xì)胞間通訊，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā),。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),，1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。鄭州外泌體提取試劑平均價(jià)格

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