膠原蛋白的提取方法：酸法提取：酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,，而引起纖維膨脹、溶解,。作為溶劑使用的酸,，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸,、硫酸,、醋酸、檸檬酸和甲酸等,。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,，用酸法提取的膠原較大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速,，所得產(chǎn)品的分子量是連續(xù)的,，適用于醫(yī)用生物材料及原料的制備，但產(chǎn)品得率低,，設(shè)備腐蝕嚴(yán)重,，污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白,，得到高純度的膠原蛋白溶液,。可直接或間接參與細(xì)胞的附著,。溫州鼠尾膠原銷(xiāo)售廠家

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M 的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌,。在2-8度中放置過(guò)夜。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。 4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過(guò)夜干燥,。如果膠原溶液不是無(wú)菌的，這時(shí)候可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒,。 在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗,。唐山正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷(xiāo)制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶,，4℃保存。

膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,，但在皮膚,、肌腱、骨骼中分布*為普遍,。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類(lèi)型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu),，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細(xì)胞,、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等。另外,，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長(zhǎng),、分化,、遷移和組織態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用,。注意事項(xiàng)：1） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。2） 整個(gè)操作請(qǐng)于冰上進(jìn)行,，因室溫下鼠尾膠原I可迅速成膠,。3） 整個(gè)操作請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下無(wú)菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長(zhǎng),。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每 3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為 3股螺旋,。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū),，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液,。

膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案：提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟： 1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對(duì)初步處理的鼠尾腱進(jìn)行 酶解,， 持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無(wú)色,、 透明,、 粘稠液體后即可在 4℃,， 5000g 的離心力下離心 20min， 收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。 2,、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀 從溶液中析出，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止,，4℃,，5000g 的離心力下離心 20min 后獲得白色沉淀。 沉淀物加入一定濃度的醋酸 溶液中溶解,。 3,、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理，重復(fù)步驟 2 的過(guò)程 2~4 次,。 _x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng) SDS- PAGE 蛋白質(zhì)電泳,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。鼠尾膠原醋酸溶解：在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。南京貴陽(yáng)鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：在2-8度中放置過(guò)夜,。溫州鼠尾膠原銷(xiāo)售廠家

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實(shí)驗(yàn)室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建,，對(duì)于其抗氧化作用目前尚無(wú)相關(guān)研究,。目的：探討鼠尾膠原對(duì)過(guò)氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機(jī)接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實(shí)驗(yàn)組）和普通培養(yǎng)皿（對(duì)照組）中,，并且均用0,，10，100μmol/L H2O2誘導(dǎo),。24 h后,，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),，應(yīng)用MTT 比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率,，TUNEL 法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率,，黃嘌呤氧化酶法檢測(cè)超氧化物歧化酶活力,，硫代巴比妥比色法檢測(cè)丙二醛水平,，Western-Blot 檢測(cè)凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá)。溫州鼠尾膠原銷(xiāo)售廠家