當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時,,外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì),、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學活性,。外泌體介導的細胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合,,進而啟動靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中,,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,,剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合,從而啟動細胞內(nèi)的信號通路,。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出,。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA,。人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體,,包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞,、血小板,、平滑肌細胞等。外泌體的提取方法:超濾離心,。南昌正規(guī)外泌體提取試劑直銷價
外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,,可通過細胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成多泡內(nèi)涵體,內(nèi)涵體與細胞膜融合后釋放其中的小囊泡,。外泌體的直徑在40-110nm之間,,其中包含RNA、蛋白質(zhì),、microRNA,、DN**段等多種物質(zhì),存在于血液,、唾液,、尿液,、腦脊液和母乳等多種體液中,。外泌體從發(fā)現(xiàn)至今已有30多年的歷史,雖然較初被認為可能是細胞的“垃圾”,,所以才被排出來,,但是近年來研究表明外泌體具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞。如今,,研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體在抗原提呈細胞中呈遞抗原程中,、一些病癥細胞發(fā)生的發(fā)展、神經(jīng)細胞信號轉(zhuǎn)導過程中都發(fā)揮著重要作用,。專利申請利用分離培養(yǎng)人尿液來源細胞并收集培養(yǎng)基來進行體外培養(yǎng),。唐山外泌體提取試劑廠家直銷首先在無菌條件下提取人體體液,并用PBS緩沖液進行稀釋,。
外泌體可通過流式,、WB(檢測指標有CD9,CD63,CD81)、電鏡觀察,、NTA粒徑追蹤等手段檢測,,普遍應用于藥物載體、疾病診斷marker,、精細醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,樣本含量低,,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法,、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等。但到目前為止,,仍沒有一種提取方法能同時保證外泌體的含量,、純度以及生物活性。外泌體是細胞間進行物質(zhì)運輸和信息交流的重要工具,,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移。與細菌傳染,,幫助細菌逃避免疫關系很大,,并與心血管疾病,老年癡呆等疾病具有密切關系
1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。它普遍存在并分布于各種體液中,,攜帶和傳遞重要的信號分子,。
外泌體的提取分離:1、PEG-base沉淀法,。聚乙二醇(PEG)可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀,,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,,現(xiàn)在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結(jié)合游離水分子有關,。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,,產(chǎn)生難以去除的聚合物,,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發(fā)表文章時易受質(zhì)疑,。2,、試劑盒提取。近幾年來,,市場上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒,,有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來,。這些試劑盒不需要特殊設備,隨著產(chǎn)品不斷更新?lián)Q代,,提取效率和純化效果逐漸提高,,因而逐漸取代超速離心法并推廣開來。有些試劑盒操作簡便,,不用超速離心,,同時可獲得高純度和高回收率的外泌體。外泌體提取色譜法是利用根據(jù)凝膠孔隙的孔徑大小與樣品分子尺寸的相對關系而對溶質(zhì)進行分離的分析的方法,。徐州正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜是基于大小而非分子量實現(xiàn)分離大分子,。南昌正規(guī)外泌體提取試劑直銷價
外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,,采用低速離心,、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過程比較費時,,且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關),,純度也受到質(zhì)疑;此外,,重復離心操作還有可能對囊泡造成損害,,從而降低其質(zhì)量,。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,,是一種區(qū)帶分離法。通過密度梯度離心,,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,,耗時,,對離心時間極為敏感南昌正規(guī)外泌體提取試劑直銷價
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