CD47是信號調(diào)節(jié)蛋白α（SIRPα,，也稱為CD172a）的配體,，CD47-SIRPα間的結(jié)合能夠發(fā)出“不要吃我”的信號,，從而壓制吞噬作用。病基因RAS能夠促進(jìn)胰腺病細(xì)胞增殖,，增強(qiáng)胞飲作用從而促進(jìn)一些病癥細(xì)胞攝取外泌體。合成納米顆粒對細(xì)胞有一定毒性作用,，但使用外泌體能夠較小化對細(xì)胞的毒性,。研究人員發(fā)現(xiàn)，CD47和病基因KRAS驅(qū)動(dòng)的胞飲作用都會(huì)壓制外泌體被循環(huán)系統(tǒng)的清理,，并增強(qiáng)胰腺病細(xì)胞對外泌體的特異性,。所以，外泌體的這種特性增強(qiáng)了它們通過遞送RNAi來特異性靶向胰腺病中的KRAS的能力,，并且使用外泌體作為單一靶向劑顯著改善了所有實(shí)驗(yàn)PDAC小鼠模型的總生存期,。超離法是常用的外泌體純化手段，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行,，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。金華外泌體提取試劑廠家

外泌體的提取方法：1.超速離心法（差速離心）。超離法是較常用的外泌體純化手段,，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。超離法因操作簡單,，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過程比較費(fèi)時(shí),，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)）,，純度也受到質(zhì)疑；此外,，重復(fù)離心操作還有可能對囊泡造成損害,，從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心,。在超速離心力作用下,，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法,。通過密度梯度離心,，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,，但步驟繁瑣,，耗時(shí)，對離心時(shí)間極為敏感,。深圳外泌體提取試劑廠家外泌體的分離純化一直是科研工作者關(guān)注的問題,，獲得高純度的外泌體對后續(xù)的研究至關(guān)重要。

外泌體的提取,、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法,；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論，較初是根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小分離蛋白質(zhì)的色譜技術(shù),。該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是不需要很大的離心力,，從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白,，結(jié)果顯示,，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規(guī)模的生產(chǎn)和臨床應(yīng)用提供了可能,。超濾也是根據(jù)外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法,，超濾一般被認(rèn)為是外泌體分離過程中的一個(gè)準(zhǔn)備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質(zhì)。不過連續(xù)的超濾可以分離出外泌體,，和超高速離心相比,，超濾不需要特殊的設(shè)備就可以較短時(shí)間內(nèi)分離出外泌體。但是,，超濾膜對外泌體的黏附作用會(huì)降低外泌體的產(chǎn)量,，并且超濾過程中施加的外力可能會(huì)使外泌體變形或者破裂。

研究中研究人員發(fā)現(xiàn),，胃病細(xì)胞周圍富含TAM,。TAM以M2極化表型為特征，并促進(jìn)胃病細(xì)胞在體外和體內(nèi)的遷移,。此外,，研究人員發(fā)現(xiàn)M2衍生的外泌體決定了TAMs介導(dǎo)的遷移活動(dòng)。通過使用質(zhì)譜方法,，研究人員確定載脂蛋白E（ApoE）是M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體中高度特異性和有效的蛋白質(zhì),。ApoE是一種M2特異性且高度豐富的來源于M2外泌體的蛋白質(zhì)，是決定胃病細(xì)胞遷移潛力的主要驅(qū)動(dòng)因素,。然而,，來自ApoE-/-的小鼠M2巨噬細(xì)胞的外泌體在體外和體內(nèi)對胃病細(xì)胞的遷移沒有顯著影響。在機(jī)制上,，M2巨噬細(xì)胞衍生的外泌體介導(dǎo)ApoE啟動(dòng)的PI3K-Akt信號通路,，并在TAM和受體胃病細(xì)胞之間進(jìn)行細(xì)胞間轉(zhuǎn)移，促進(jìn)細(xì)胞骨架的遷移,?？偟膩碚f，該研究發(fā)現(xiàn)外泌體介導(dǎo)的功能性ApoE蛋白從TAM轉(zhuǎn)移到一些病癥細(xì)胞,，促進(jìn)了胃病細(xì)胞的遷移,。超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心,、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒,。

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡,，直徑約為30-200nm，密度在1.13-1.21g/ml,，具有杯狀形態(tài),、雙層膜結(jié)構(gòu)，天然存在于血液,、尿液,、唾液、母乳和細(xì)胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細(xì)胞在內(nèi)幾乎所有類型的細(xì)胞（免疫細(xì)胞,、神經(jīng)細(xì)胞,、干細(xì)胞)，都可以產(chǎn)生并釋放exosome,。Exosome內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)rRNA和microRNA,，Exosome可通過細(xì)胞膜受體直接受體細(xì)胞，也可運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì),、mRNA,、miRNA、lncRNA,、circRNA,，甚至細(xì)胞器進(jìn)入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊,。Exosome在免疫應(yīng)答,、炎癥反應(yīng)、血管生成,、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關(guān)鍵作用，不同細(xì)胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物,，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子,，它可以通過外泌體從一個(gè)地方轉(zhuǎn)運(yùn)到另外一個(gè)地方行使基因沉默功能,。通過檢測外泌體中miRNA表達(dá)變化，可以發(fā)現(xiàn)外泌體中miRNA特異性功能此提取方法條件復(fù)雜,，成本高,。寧波外泌體提取試劑平均價(jià)格

靜置10～15分鐘，留取沉淀物備用,。金華外泌體提取試劑廠家

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是超速離心法,，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,，但是純度不足,，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體,。二是過濾離心，這種操作簡單,、省時(shí),，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法,，用此種方法分離到的外泌體純度高,，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí),，量少,。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,，特異性高,、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性,，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。五是PS親和法,，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合,，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,，獲得的外泌體形態(tài)完整,，純度較高。由于不使用變性劑,，不影響外泌體的生物活性,，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù),，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體,。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,，但是需要特殊的設(shè)備,，應(yīng)用不普遍。金華外泌體提取試劑廠家