膠原蛋白的提取方法:1.堿法提取:堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉,、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%~1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白,。由于它容易造成肽鍵水解,,因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以,,若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu),,此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl),、氯化鈉、檸檬酸鹽等,。在中性條件下,,當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí),膠原溶解,。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理,,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。將無組織纖維,、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,,真空冷凍干燥備用。金華正規(guī)鼠尾膠原哪家好
詳細(xì)步驟如下:1.75%酒精浸泡大鼠尾巴30min,;2.將尾巴剪開,、去掉皮毛,并剪成小段(3cm左右),,抽出銀色的尾鍵,;3.把剪碎的尾鍵置于150ml,0.1%消過毒的醋酸中,,4℃放置,,并不時(shí)振蕩;4.48h后取上清,,4000轉(zhuǎn)離心30min后,,取上清;5.分裝上清(鼠尾膠)4度(或-20度)保存,。有時(shí)可繼續(xù)向4,。中沉淀中加入10-20ml醋酸,,重復(fù)以上步驟,以制備更多的鼠尾膠,。在使用時(shí),,先將冰存的膠原液在室溫下解凍,再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿:1)用吸管吸取膠原液,,在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液,。2)若包被的是培養(yǎng)瓶,可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶內(nèi)后,,即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話,,可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),,將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),蓋緊飯盒蓋,,四周用封口膠封死,。寧波鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展,各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異,。止血材料是常見的醫(yī)療器械產(chǎn)品,。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點(diǎn);同時(shí)還存在著容易與傷口粘附不易去除,,導(dǎo)致傷口潰爛,或者因?yàn)檎掣綄?dǎo)致傳染,;再次就是止血材料多是通過吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血,,很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來生產(chǎn)的。現(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素,、α-氰基丙烯酸酯類組織膠,、醫(yī)用止血明膠等,但是都有各自的缺點(diǎn),。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高,;α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì);醫(yī)用止血明膠黏附性較差,,易脫落,,因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜,。膠原蛋白(Collagen)是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分,。
鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用:探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原,,觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中,,自制的鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用。結(jié)果無鼠尾膠原時(shí),,前庭毛細(xì)胞懸浮于外液,,不宜封接;有鼠尾膠原時(shí),,前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,,易于封接和長時(shí)間(約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用,。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,,成本低廉,。當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,制備細(xì)胞爬片時(shí),,可在瓶底涂一層膠原,。石家莊正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷
鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠。金華正規(guī)鼠尾膠原哪家好
除了讓細(xì)胞更好貼上去,,鼠尾膠原蛋白還能用于制備三維膠,,這樣可以在培養(yǎng)皿中一定程度上模擬身體內(nèi)部的生長環(huán)境,讓細(xì)胞在更真實(shí)地條件下進(jìn)行生長,。當(dāng)然,,除了這些,耗子尾汁還能做到很多事情,,只需要打開網(wǎng)站——知網(wǎng),,輸入鼠尾膠原蛋白就能看到,,例如鼠尾膠原蛋白可用于制備防皺保濕或美白產(chǎn)品,制作止血海綿敷料等各種用途,。NO.3鼠尾DNA除了從整條鼠尾中提取的鼠尾膠原蛋白,,老鼠的尾巴尖尖也是制備「耗子尾汁」的好材料。這類「耗子尾汁」通常用來鑒別耗子的基因型,,對于轉(zhuǎn)基因小鼠而言,,如果無法通過毛色來分辨動(dòng)物的基因型,往往會(huì)選用經(jīng)典的PCR法,。金華正規(guī)鼠尾膠原哪家好