無(wú)血清細(xì)胞凍存液:凍存注意:開(kāi)蓋之前,,用70%的乙醇或異丙醇擦拭瓶身,。以下說(shuō)明適用于在6孔板內(nèi)的培養(yǎng)物的凍存。培養(yǎng)物應(yīng)該在適合傳代的時(shí)候進(jìn)行收集和凍存。每管所含有的細(xì)胞應(yīng)當(dāng)來(lái)源于6孔板的1個(gè)培養(yǎng)孔,。如果使用其他的培養(yǎng)器皿,,請(qǐng)相應(yīng)的調(diào)整體積。1.在室溫(15-25°C)以300xg離心5分鐘,。2.輕輕吸走上清液,,注意不要擾動(dòng)細(xì)胞團(tuán)。3.用血清學(xué)吸管以1mL的TBD-698重懸細(xì)胞,。在打散細(xì)胞團(tuán)時(shí),盡量減少細(xì)胞聚集體分解,。4.用2mL的血清學(xué)吸管將1mL的細(xì)胞聚集體轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的凍存管中,。5.用以下方法凍存細(xì)胞聚集體:推薦使用緩速降溫方法,每分鐘降低1度,,隨后可以在-196°C液氮長(zhǎng)期保存,。不推薦在-80°C長(zhǎng)期保存。逐步降溫法:-20°C保存2個(gè)小時(shí),,然后-80°C中保存2個(gè)小時(shí),,隨后可以在-196°C液氮中長(zhǎng)期保存。無(wú)血清細(xì)胞凍存液可用于T淋巴細(xì)胞,、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲(chǔ),。徐州唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):1.取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,護(hù)目鏡,。此項(xiàng)尤為重要,,細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,,可導(dǎo)致炸列,。2.凍存液的問(wèn)題:凍存液的配置已是常識(shí),在這里不作詳述,,但二甲基亞砜(DMSO)對(duì)細(xì)胞不是完全無(wú)毒副作用,,在常溫下,二甲基亞砜對(duì)細(xì)胞的毒副作較大,,因此,,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,,會(huì)造成細(xì)胞的損傷,,二甲基亞砜(DMSO)選擇進(jìn)口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液,。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對(duì)細(xì)胞的損傷。徐州唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液無(wú)血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品性能:傳統(tǒng)的凍存液,,一般由胎牛血清,、DMSO等組分組成。
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力,。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷,。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷,。細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng),、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段,。在細(xì)胞建株和建系中,,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,,雜交瘤細(xì)胞,、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是必不可少的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染,、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄,。
細(xì)胞凍存配制含10%DMSO或甘油的細(xì)胞凍存液,4℃預(yù)冷(新鮮配制的凍存液會(huì)產(chǎn)生大量的熱),;取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,,用細(xì)胞消化酶將單層生長(zhǎng)的細(xì)胞消化下來(lái);懸浮細(xì)胞則直接將細(xì)胞收集到離心管中,;離心1200rpm,,6min;去除上清液,,逐漸加入適量預(yù)冷的細(xì)胞凍存液,,用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻,計(jì)數(shù),,調(diào)節(jié)凍存液中的細(xì)胞終濃度為5×10e6/ml~1×10e7/ml,;將細(xì)胞分裝入凍存管中,,每管1~1.5ml;在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱(chēng),、凍存時(shí)間及操作人員姓名,;凍存:標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1~-2℃/min;到達(dá)-80℃時(shí),,則可迅速放入液氮中,。無(wú)血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):無(wú)血清細(xì)胞凍存液是不含血清和動(dòng)物源成分。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一,。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。細(xì)胞凍存的原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。根據(jù)密度調(diào)整細(xì)胞凍存 液用量,。唐山正規(guī)無(wú)血清細(xì)胞凍存液直銷(xiāo)廠家
無(wú)任何外源蛋白和血清,,適用于各類(lèi)動(dòng)物細(xì)胞株凍存。徐州唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液
無(wú)血清細(xì)胞凍存液是一種無(wú)血清細(xì)胞凍存液,,通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株(tumour細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞),,凍存細(xì)胞可在-80℃長(zhǎng)期保存(>5年)。CELLSAVING配方成分明確,,不含動(dòng)物來(lái)源性蛋白,,不含血清,可減少各類(lèi)細(xì)菌,、病毒和支原體等污染,,保證凍存細(xì)胞的安全。細(xì)胞凍存液操作簡(jiǎn)便,,無(wú)需程序降溫,,可在-80度或液氮中長(zhǎng)期保存。相比于傳統(tǒng)凍存液,,埃澤思生物推出的此款凍存液可以明顯增加細(xì)胞活力,,穩(wěn)定保持細(xì)胞特性,以及細(xì)胞多能性,并且可以穩(wěn)定保持細(xì)胞的正常核型和增殖能力,。細(xì)胞凍存液已經(jīng)經(jīng)過(guò)動(dòng)物直接注射實(shí)驗(yàn)檢測(cè),,包括靜脈注射,皮下注射途徑,,無(wú)明顯細(xì)胞毒性,,動(dòng)物安全性非常高。徐州唐山無(wú)血清細(xì)胞凍存液