鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,，pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和,。需要的溶液（均需要無菌、預(yù)冷）10mg/L酚紅用于pH指示）0.1mol/LNaOH,，0.1mol/L乙酸(一般不用),，雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）立即混勻,。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。I型膠原蛋白分布非常普遍,，是主纖維束的主要成分,。太原正規(guī)鼠尾膠原

具體實施方式實施例1止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇,、殼聚糖作為輔料,。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為0.2%0.2%。余量為水,。2,、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板，-40°C預(yù)凍池,，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h,，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌,，干燥保存,。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實施例2止血材料的制備1,、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇,、殼聚糖作為輔料。各個材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇殼聚糖為5%2%1%,，余量為水,。2、將混合材料用無菌水溶解后澆入培養(yǎng)板,，-20°C預(yù)凍,，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h,，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料,。Co60輻射滅菌，干燥保存,。長沙鼠尾膠原廠家供應(yīng)鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用。

膠原蛋白的功效與作用：可以預(yù)防心血管病,。研究表明,，膠原蛋白可以降低血甘油三酯和膽固醇，并可增高體內(nèi)某些缺乏的必需微量元素,，從而使其維持在一個相對正常的范圍之內(nèi),，是一種理想的降血脂食品。此外,，膠原蛋白在協(xié)助機體排出鋁質(zhì),，減少鋁質(zhì)在體內(nèi)聚集方面也有獨特之處。鋁對人體有害,，研究表明,，日前逐漸增多的老年癡呆癥與鋁的攝入量有關(guān)，同時膠原蛋白有加速血紅蛋白和紅細胞生成的功效,，它具有改善循環(huán),、對、缺血性腦病有利,。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導(dǎo)致丟失蛋白,。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的，這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒,。在接種細胞前用無菌的水漂洗,。鼠尾Ⅰ型膠原：選擇適當?shù)墓切迯?fù)材料是治好骨缺損的中心環(huán)節(jié)。

使用方法：1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被：以包被濃度為2μg/cm2為例,，用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。開蓋在超凈臺上過夜晾干，也可以在室溫放置1小時后,，用PBS洗3~4次后直接使用,。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。2,、三維膠原凝膠的制備：A,、無細胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水,，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻,。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要測定pH值）,。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS,，使用前需要加入適當體積的細胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。鼠尾膠原醋酸溶解：在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。蕪湖鼠尾膠原供應(yīng)商

制備鼠尾膠原：離心,，4000轉(zhuǎn)/分,，10-15分鐘。太原正規(guī)鼠尾膠原

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：兩組培養(yǎng)皿中,，隨著過氧化氫濃度的增高,，均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重，細胞存活率及細胞內(nèi)過氧化氫活力明顯下降,，細胞凋亡率及細胞內(nèi)丙二醛水平明顯增高,，Bcl-2/Bax比值明顯降低，呈劑量依賴性,。而在相同濃度過氧化氫誘導(dǎo)下,，與對照組相比，實驗組細胞凋亡狀態(tài)明顯減弱,，細胞存活率,、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高，細胞凋亡率和丙二醛水平明顯減低,。表明鼠尾膠原對過氧化氫所致的心肌細胞氧化損傷具有保護作用,，其機制可能與提高超氧化物歧化酶活力，減少丙二醛產(chǎn)生及提高Bcl-2的表達有關(guān),。太原正規(guī)鼠尾膠原