RNA提取試劑的選擇:選擇合適的提取試劑是較重要的一步,。好的提取試劑在確保成功的同時(shí),,操作方便且經(jīng)濟(jì)實(shí)用。對(duì)于動(dòng)物組織,、簡(jiǎn)單的植物材料,、各種微生物,、培養(yǎng)細(xì)胞的totalRNA提取,,Takara公司的RNAisoPlus具有諸多的成功案例。隨著2013年7月柱型提取試劑TaKaRaMiniBESTUniversalTotalRNAExtractionKit的成功上市,,進(jìn)一步豐富了TakaraRNA提取的產(chǎn)品線,。該產(chǎn)品采用了獨(dú)特的細(xì)胞裂解系統(tǒng),無(wú)需苯酚氯仿抽提等步驟,,簡(jiǎn)單快捷,。組織或細(xì)胞裂解后,提取操作光需20分鐘便可完成,。拭子RNA提取試劑的選擇,?洗脫液洗脫能力好,核酸的提取得率就高,。成都RNA提取試劑服務(wù)電話
RNA提取關(guān)鍵點(diǎn):RNA的產(chǎn)量和質(zhì)量也是另無(wú)數(shù)人頭疼的問(wèn)題,,較佳方法是保證樣品完全裂解,但相同的裂解方案換了一個(gè)樣本可能就沒(méi)轍了,。為了提高裂解效果,,可以將裂解緩沖液與機(jī)械裂解步驟(研磨珠破碎)匹配,或者在裂解液上游加入酶裂解步驟(如蛋白酶K,、溶菌酶等),。BIOG血液RNA快速提取試劑盒是公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)在綜合比較了國(guó)外同類(lèi)較好產(chǎn)品的基礎(chǔ)上反復(fù)研制優(yōu)化而成,專(zhuān)門(mén)用于血液RNA的快速提取純化,。本試劑盒采用獨(dú)特的裂解液配方,,可直接從新鮮、冷凍或陳舊的全血中提取高質(zhì)量的RNA,,操作簡(jiǎn)便快速,,只需15分鐘即可完成血液RNA提取。RNA提取得率較高,,可在200μL全血中提取5μg左右RNA,。BIOG血液RNA快速提取試劑盒采用了較新的較好離子膜,裂解液和洗脫液經(jīng)過(guò)多次優(yōu)化,,有效地去除了蛋白,、色素、脂類(lèi)等雜質(zhì)污染,,特別適用于血液包括細(xì)菌,、病菌等傳染的分子檢測(cè)。廣州正規(guī)RNA提取試劑推薦廠家專(zhuān)門(mén)的高鹽緩沖系統(tǒng)允許RNA物質(zhì)基團(tuán)結(jié)合到旋轉(zhuǎn)柱的玻璃纖維基質(zhì)上,,同時(shí)使污染物通過(guò)柱被有效地洗去,。
昆蟲(chóng)RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,,棄穿透液,。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液,。加0.7mL通用洗柱液,,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液,。加0.3mL通用洗柱液,,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液,。此步可以省略,。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用,。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,,室溫放置1~2分鐘,。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,,可以立即使用或存放于-80℃待用
細(xì)菌RNA快速提取試劑盒:該產(chǎn)品基于獨(dú)特的裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞RNA酶,,然后用乙醇調(diào)節(jié)結(jié)合條件后,總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,,再通過(guò)一系列快速的去蛋白,、漂洗的步驟將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,,較后低鹽的RNaseFreeH2O將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫,。該產(chǎn)品可在30min內(nèi)完成樣品RNA的提取,提取的總RNA完整性好,,無(wú)蛋白和基因組DNA污染,。注意事項(xiàng):初次使用前請(qǐng)先在漂洗液RW瓶加入指定量無(wú)水乙醇,加入后請(qǐng)及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇,,以免多次加入,!裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,,避免沾染皮膚,,眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時(shí),,要用大量清水或者生理鹽水沖洗,。所有離心操作步驟,,均可在室溫(15-25℃)下進(jìn)行,。提取細(xì)菌RNA需先配制加了溶菌酶或者Lysostaphin的TE(10mMTris-HCl,1mMEDTA),,TE中已加入溶菌酶或者Lysostaphin,,濃度為1mg/mL。RNA提取試劑注意事項(xiàng):如皮膚接觸TRIReagent,,請(qǐng)立即用大量去垢劑和水沖洗,。
細(xì)胞外RNA(exRNA)已成為研究界的新寵。近年來(lái),,人們?cè)谘獫{或血清樣本中成功檢測(cè)到疾病相關(guān)的exRNA,,使其有望成為非侵入性的生物標(biāo)志物。然而,,從血漿或血清中分離exRNA仍頗具挑戰(zhàn)性,,這一方面是因?yàn)閑xRNA豐度低,另一方面是因?yàn)檠褐械奈廴疚飼?huì)壓制PCR,。商品化的試劑盒能簡(jiǎn)化和加速exRNA提取過(guò)程,,已成為循環(huán)exRNA研究不可缺少的工具。然而,,這些試劑盒的提取效率如何,,是否能去除血漿中的污染物,是否會(huì)偏向特定的RNA,,都沒(méi)有經(jīng)過(guò)評(píng)估,,而這類(lèi)評(píng)估對(duì)于結(jié)果解釋和實(shí)驗(yàn)之間的比較都很關(guān)鍵。以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,,可調(diào)節(jié)基因表達(dá),。無(wú)錫RNA提取試劑廠家推薦
血漿/血清RNA提取試劑盒:沒(méi)有DNA和蛋白質(zhì)的污染,適用于RT-PCR,、qRT-PCR,、芯片分析。成都RNA提取試劑服務(wù)電話
RNA提取醇沉淀不是越多就越好,。有些實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦,,在異丙醇沉淀后,用乙醇沉淀兩次,。實(shí)際上,,任何提取實(shí)驗(yàn),都會(huì)在純度和得率這一對(duì)矛盾中取舍,。醇沉淀會(huì)將脂溶性雜質(zhì)去掉,,但部分非脂溶性的雜質(zhì)依然會(huì)連同RNA一起被沉淀下來(lái)。因此,多整幾次,,并不會(huì)讓RNA的純度翻倍,,反而還會(huì)有降低得率的風(fēng)險(xiǎn)。一般情況下,,異丙醇和乙醇各沉淀一次即可,。但是,倘若預(yù)計(jì)RNA濃度很低,,那就只能放棄純度,,在低溫沉淀數(shù)小時(shí),以換來(lái)較高的得率,。圍繞DEPC的玄學(xué),。許多實(shí)驗(yàn)方案會(huì)推薦使用0.1%DEPC處理RNA相關(guān)用水,以滅活RNase,。這一點(diǎn)是要肯定的,。不過(guò),在使用DEPC的過(guò)程中,,又充斥著一些玄學(xué),。高壓滅菌后的DEPC水,會(huì)有一股“香甜”的味道,。許多人會(huì)以為那是殘留的DEPC而不敢用,。實(shí)際上,這只是DEPC分解成CO2和乙醇后,,產(chǎn)生的一些揮發(fā)性酯類(lèi)副產(chǎn)物,。成都RNA提取試劑服務(wù)電話