鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法,。各個(gè)材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水,，采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收,、容易引起機(jī)體過敏,、止血效果差等缺點(diǎn),，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收,，生物相容性好；止血效果快,，具有很強(qiáng)的親水性,；同時(shí)可啟動(dòng)血小板的凝聚，一旦血小板凝聚,，就可形成血栓,，進(jìn)而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時(shí),，膠原表面的特定區(qū)域可以與細(xì)胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合,，可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

膠原蛋白分離提純實(shí)驗(yàn)方案：提取鼠尾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)步驟：1,、使用溶解有一定比例胃蛋白酶的酸溶液對初步處理的鼠尾腱進(jìn)行酶解，持續(xù)一段時(shí)間待混合物變成無色,、透明,、粘稠液體后即可在4℃，5000g的離心力下離心20min,，收集上清即為粗制鼠尾膠原蛋白原液,。2、將一定濃度的氯化鈉溶液加入其中,，持續(xù)攪拌直至白色絮狀沉淀從溶液中析出,，繼續(xù)加入氯化銨直至沉淀不在析出為止，4℃,，5000g的離心力下離心20min后獲得白色沉淀,。沉淀物加入一定濃度的醋酸溶液中溶解。3,、將溶解后的鼠尾膠原蛋白溶液繼續(xù)反復(fù)進(jìn)行鹽析處理,，重復(fù)步驟2的過程2~4次。_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x005f_x000c_鼠尾膠原蛋白經(jīng)SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳,。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。青島正規(guī)鼠尾膠原銷售廠家制備鼠尾膠原：按每克尾腱50ml的比例，加入0.1%醋酸溶液,。

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心,，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純,。從提取原料到樣品生成過程中，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉,；較后由滅菌、無菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上,。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本,，適用于生物醫(yī)用材料,。

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來源之一。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法,。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基,。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2、PECAM1,、vWF,、CD34、VE-cadherin,、GATA-2,。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin、CD31,。③分化細(xì)胞具有吞噬低密度脂蛋白功能,。說明將人胚胎干細(xì)胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細(xì)胞。為研究胞外基質(zhì)對誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的作用以及相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制打下了基礎(chǔ),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。鼠尾膠原醋酸溶解：在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。

鼠尾膠原蛋白I型,，用那一種膠原酶可以溶解：1．將膠原加入到0.1M的醋酸中,，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解,。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌,。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。我們不建議用過濾的方法無菌化,。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過夜。5．從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的,，這時(shí)候可以在無菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細(xì)胞前用無菌的水漂洗,。建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,。鄭州鼠尾膠原

免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家

一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法：1.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,；在冰水浴中，調(diào)節(jié)pH=6.5,，用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中，不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,，4°C沉淀10小時(shí),，去除上清液，去除上清液,，絮狀溶液高速冷凍離心處理,，收集沉淀；2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸再次溶液溶解沉淀物,，成透明澄清黏稠溶液,，冰水浴中，調(diào)節(jié)PH=6.5;溶液依次通過陽離子交換樹脂,、陰離子交換樹脂進(jìn)行脫鹽處理,；(8)將脫鹽后的膠原蛋白溶液，-40至-20°C預(yù)凍2?4小時(shí),，然后真空冷凍干燥,，凍干產(chǎn)品經(jīng)進(jìn)一步處理得到含水率在3%以下的膠原蛋白微粉，滅菌,、包裝,，得到成品膠原蛋白粉末。深圳鼠尾膠原生產(chǎn)廠家