鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿,,培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞,。也可用于制備三維膠,,模擬真實的生長環(huán)境,使細胞在三維環(huán)境中生長,。1,,在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上,,pH左右時可形成具有一定強度的三維膠,,檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長,。使用方法:1,、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度:1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養(yǎng)器皿中,。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構,。上海鼠尾膠原直銷價
鼠尾膠原蛋白I型,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M的醋酸中,,制備成濃度為0.1%的溶液,。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中,,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿,。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌,。在2-8度中放置過夜,。在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會導致丟失蛋白,。3.稀釋一定數(shù)量的膠原溶液,。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結合數(shù)小時或者2-8度過夜,。5.從包被表面除去多余的液體,。過夜干燥,。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗,。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,,并且制作簡便,,成本低廉。寧波天津鼠尾膠原鼠尾膠原醋酸溶解:在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液,。
細胞培養(yǎng)過程中,,細胞需要貼附在培養(yǎng)皿表面(懸浮培養(yǎng)細胞除外)才能完成生長過程,而有一些細胞卻總是不太給力,,自己完成不了貼壁過程或者貼壁困難,,這個時候鼠尾膠原蛋白就能承擔起讓細胞更容易貼壁的作用。這一步也被稱作涂層(coating),,給培養(yǎng)皿涂上了一層膠原蛋白后,,細胞就能更好地貼附上去,除了培養(yǎng)皿,,一些需要使用海藻碳酸鈣微球培養(yǎng)得細胞,,同樣也可以用鼠尾膠原蛋白協(xié)助細胞貼壁生長。耗子尾汁還能變得更加,,一種被稱作鼠尾膠原蛋白的“珍貴”液體就來自大鼠的尾巴,,制作過程需要經(jīng)歷醋酸抽提
一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法:隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展,各種醫(yī)用耗材的更新?lián)Q代也是日新月異,。止血材料是常見的醫(yī)療器械產(chǎn)品,。但是現(xiàn)今市面上的止血材料不光存在著容易引起傷口傳染的缺點;同時還存在著容易與傷口粘附不易去除,,導致傷口潰爛,,或者因為粘附導致傳染;再次就是止血材料多是通過吸收血液及添加凝血酶等外在因素止血,,很少有止血材料是使用能夠自身具有止血性質(zhì)的材料來生產(chǎn)的?,F(xiàn)今市面上的可吸收止血材料有氧化纖維素、α-氰基丙烯酸酯類組織膠,、醫(yī)用止血明膠等,,但是都有各自的缺點,。如氧化纖維素可引起組織周圍PH值升高;α-氰基丙烯酸酯類組織膠降解過程中釋放出氰和甲醛等有毒物質(zhì),;醫(yī)用止血明膠黏附性較差,,易脫落,因其吸收血液后膨脹可能壓迫傷口周圍組織等,。鼠尾I型膠原蛋白系采用方法在無菌下制備,,純度達到95%以上。
要準備的器具:組織剪2把,,有齒鑷1把,,無齒鑷1把,200ml燒杯1個,,培養(yǎng)皿1個,,帶蓋廣口瓶1個,離心管,、小瓶數(shù)個,,滴管若干。以上物品須經(jīng)嚴格高壓消毒滅菌,。需配制的液體0.1%醋酸溶液,。經(jīng)44.48N10min高壓蒸汽滅菌(或是過濾除菌)后備用。此外還有用消毒雙蒸水配制75%酒精溶液,。取大鼠尾巴,,洗凈,置75%酒精浸泡消毒后,,手持尾巴,用止血鉗夾住尾巴較高,,折斷尾骨后拉出尾腱,,將尾腱剪碎后置消毒的三角燒瓶中,稱尾腱的重量,,按每克尾腱50ml的比例加入0.1%醋酸溶液,,搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,,4℃放置48小時,,離心。吸取其上清,,分裝至小瓶,,4℃保存。上述制備過程均在無菌條件下完成,。膠原蛋白按其應用可以分為食品級,、一般級、醫(yī)藥級。金華鼠尾膠原產(chǎn)品介紹
鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。上海鼠尾膠原直銷價
鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究,。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用,。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,,10,,100μmol/LH2O2誘導。24h后,,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),,應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),,流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達。上海鼠尾膠原直銷價