1983年,,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),,1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液、唾液,、尿液,、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成,、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究,。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實(shí)現(xiàn)這項(xiàng)新興液體活檢技術(shù)臨床常規(guī)化應(yīng)用的關(guān)鍵來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)
為了分離外泌體,研究人員用兩個(gè)這樣的單元串聯(lián)構(gòu)建了一個(gè)裝置,。首先,使用聲波從血液樣品中除去細(xì)胞和血小板,。一旦細(xì)胞和血小板被去除,,樣品進(jìn)入第二個(gè)微流體單元,然后使用較高頻率的聲波將外泌體與稍大的細(xì)胞外囊泡分開,。這項(xiàng)工作的通訊作者之一,,麻省理工學(xué)院材料科學(xué)與工程系科學(xué)家MingDao博士說:“聲波更溫和。而且在分離時(shí),,這些囊泡受處理的時(shí)間只有1秒鐘或更短,。這是一個(gè)很大的優(yōu)勢(shì)?!笔褂迷撛O(shè)備,,處理100微升未稀釋血液樣本只需要不到25分鐘?!斑@種新技術(shù)可以解決當(dāng)前外泌體分離技術(shù)的缺點(diǎn),,如周期長(zhǎng),一致性差,產(chǎn)量低,,污染以及完整性受損等,。我們想要把提取高質(zhì)量的外泌體的過程簡(jiǎn)化為按一個(gè)按鈕就在10分鐘內(nèi)獲得所需樣品一樣簡(jiǎn)單?!毖芯咳藛T們說,。上海正規(guī)外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,。
外泌體與神經(jīng)退行性疾?。和饷隗w可能促進(jìn)或限制大腦中未折疊和異常折疊的蛋白質(zhì)的聚集。AD病人腦脊液外泌體中均可檢測(cè)到Tau和Aβ蛋白,。類似的現(xiàn)象也在PD和ALS疾病中發(fā)現(xiàn),。PD病人腦脊液外泌體可檢測(cè)到α-synuclein,ALS病人外泌體中也可以檢測(cè)到SOD1或TDP-43,。外泌體與疾病診斷(應(yīng)用潛能):外泌體生成機(jī)制表明,,通過分析外泌體的組分,可以幫助識(shí)別其來源的細(xì)胞類型,。這一特性已被應(yīng)用于開發(fā)心血管疾病,,神經(jīng)系統(tǒng)疾病和一些病癥的分子診斷方法,也在肝腎肺相關(guān)疾病中進(jìn)行研發(fā)測(cè)試,。將沉淀物用PBS緩沖液進(jìn)行懸浮,,使外泌體懸浮于液體上層
外泌體是細(xì)胞間進(jìn)行物質(zhì)運(yùn)輸和信息交流的重要工具,可以通過調(diào)節(jié)免疫功能促進(jìn)一些病癥的增殖,,血管新生和一些病癥轉(zhuǎn)移,。與細(xì)菌傳染,幫助細(xì)菌逃避免疫關(guān)系很大,,并與心血管疾病,,老年癡呆等疾病具有密切關(guān)系。外泌體可通過流式,、WB(檢測(cè)指標(biāo)有CD9,CD63,CD81),、電鏡觀察、NTA粒徑追蹤等手段檢測(cè),,普遍應(yīng)用于藥物載體,、疾病診斷marker、精細(xì)醫(yī)療,、一些病癥治病等方面研究,。由于外泌體直徑小,樣本含量低,,提取十分困難,。已有的外泌體分離方式有密度梯度離心、超濾離心法、免疫磁珠抗體捕獲,、商用試劑盒等,。但到目前為止,仍沒有一種提取方法能同時(shí)保證外泌體的含量,、純度以及生物活性,。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,。
外泌體提?。撼叽缗抛枭V。尺寸排阻色譜(Size-exclusionchromatography,,SEC)是基于大小而非分子量實(shí)現(xiàn)分離大分子,。該技術(shù)應(yīng)用填充多孔聚合物微球的柱子,分子根據(jù)其直徑通過微球,,半徑小的分子需要更長(zhǎng)的時(shí)間才能通過色譜柱的孔隙遷移,,而大分子則從色譜柱中更早地洗脫。尺寸排阻色譜可以精確分離大小分子,。此外,,可以將不同的洗脫溶液應(yīng)用于該方法。與離心方法相比,,色譜分離已被證明具有更多優(yōu)勢(shì),,因?yàn)橥ㄟ^色譜分離的外泌體不受剪切力的影響,這可能會(huì)改變囊泡的結(jié)構(gòu),。目前,,SEC是一種普遍接受的分離血液和尿液中外泌體的技術(shù)。不過,,該方法耗時(shí)較長(zhǎng),,不適合大量樣本處理外泌體提取:使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話
外泌體提取:樣本的粘度與分離的外泌體純度有顯著的相關(guān)性,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)
外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,,而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高,、操作難度大,。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,組分經(jīng)過優(yōu)化處理,,適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、血清、血漿、尿液及其他體液(腦脊液,、腹水,、羊水、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,,并搭配純化過濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項(xiàng):1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過大時(shí),,可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理,。2.當(dāng)血清、血漿,、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時(shí),可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過EPF柱離心,。唐山正規(guī)外泌體提取試劑廠家供應(yīng)