鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果,。方法制作鼠尾膠原,，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用,。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí),，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接,；有鼠尾膠原時(shí),，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間（約8h)的觀察和記錄,。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用,。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋,。杭州南昌鼠尾膠原

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞（特別是上皮細(xì)胞）貼壁的作用,，同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,，當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片，制備細(xì)胞爬片時(shí),，可在瓶底涂一層膠原,，再放上小玻片，自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中,。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,，以及如何切割小玻片，并利用鼠尾膠原將其固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),。實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料：大鼠尾巴,、剪刀,、鑷子、止血鉗,、彎頭吸管,、平皿、三角燒瓶,、燒杯,、量筒、天平,、生理鹽水,、75%酒精、0.1%醋酸溶液,、蓋玻片,、培養(yǎng)瓶、鉆石筆,、鼠尾膠原,。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1、制備鼠尾膠原,。2,、切割小玻片。3,、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。深圳正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,。

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提取：堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉,、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白,。由于它容易造成肽鍵水解,，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以,，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu),，此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl),、氯化鈉,、檸檬酸鹽等。在中性條件下,，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí),，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理,，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白,。

生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,，保持恒低溫?zé)o菌的環(huán)境,，利用同樣濃度的鹽溶液進(jìn)行兩次鹽析與離心，簡(jiǎn)化了提純步驟,。所用酸為低濃度酸溶液,，并采用檸檬酸替代醋酸進(jìn)行提純。從提取原料到樣品生成過(guò)程中,，進(jìn)行多次真空冷凍干燥,，并經(jīng)進(jìn)一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌,、無(wú)菌包裝,，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性,，提高了產(chǎn)率和生物相容性,，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料,，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu),。鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同,，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋,。3條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋,。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部,。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）,。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū),，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉,。對(duì)于生物科研汪們來(lái)說(shuō),，大白鼠、小白鼠們簡(jiǎn)直渾身是寶,。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家批發(fā)價(jià)

鼠尾膠原醋酸溶解：按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶,。杭州南昌鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入690ulH2O,。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。杭州南昌鼠尾膠原