外泌體的提取,、分離方法：超高速離心法。常用的是超高速離心法,，該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”,。該方法利用離心力從細(xì)胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體，經(jīng)過400×g,、2000×g,、10000×g的低速離心，除去細(xì)胞及大的細(xì)胞分泌物,；較后超高速100000×g離心得到外泌體[12],。超高速離心因操作簡(jiǎn)單，不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,，并且成本相對(duì)較低而被普遍使用,。但是該方法耗時(shí)、產(chǎn)率低,，得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型,、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響，其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,，但也會(huì)有其他的囊泡,、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。同時(shí)可獲得高純度和高回收率的外泌體——如新西蘭IZON開發(fā)的系列的外泌體排阻劑,。武漢正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

外泌體的提取,、分離方法：梯度密度離心法。研究發(fā)現(xiàn),，外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,，因此，可以采用密度梯度離心法來分離外泌體,。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,，原理是先除去非囊泡物質(zhì)，再通過梯度密度濃縮提取外泌體,，該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體,。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h，但是2012年,，研究者[15]使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,，因此,，該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時(shí)間不充足,，污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,，特別是這個(gè)密度范圍又比較寬。珠海正規(guī)外泌體提取試劑服務(wù)電話有的是通過特殊設(shè)計(jì)的過濾器過濾掉雜質(zhì)成分,，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化,。

外泌體（Exosomes）是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡（ExtracellularVesicles，EVs）,，其大小為30-150nm,，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸,、蛋白和脂質(zhì)等）,，參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,，包括血液、唾液,、尿液,、乳汁等，同時(shí)也存在于組織樣本中,，如腦組織,、肌肉組織、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡(jiǎn)述：將腦組織剪成薄片,，放入離心管中加上消化液進(jìn)行消化，經(jīng)水浴,、反復(fù)輕輕上下顛倒,，再用移液間斷緩慢吹吸至消化結(jié)束。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,，混勻,，置于冰上。再進(jìn)行一系列的差速超速離心過程,，包括除雜,、濾膜過濾、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,，用重懸后的外泌體進(jìn)行下面的透射電鏡（TEM）、納米粒徑追蹤分子（NTA）和markerWB鑒定,。來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中

有研究發(fā)現(xiàn),，NSCLC患者肺組織外泌體表面EGFR免疫染色呈陽性的占80%，而慢性肺炎組織的外泌體EGFR呈陽性的只占2%,，因而認(rèn)為外泌體的EGFR蛋白可以用作NSCLC與慢性肺炎鑒別診斷的生物標(biāo)志物,。Park等通過Sys-BodyFlu-id數(shù)據(jù)庫分析發(fā)現(xiàn)153種特異性胸腔積液外泌體蛋白質(zhì)，進(jìn)一步的Westernblotting分析顯示多種特異性胸腔積液外泌體蛋白參與EGFR信號(hào)傳導(dǎo)途徑以促進(jìn)一些病癥的發(fā)生的發(fā)展,，因此外泌體蛋白可能作為肺病診斷篩查的生物學(xué)標(biāo)記物,。外泌體相關(guān)蛋白質(zhì)與肺病的診斷：近年來眾多文獻(xiàn)報(bào)道，肺病細(xì)胞分泌的外泌體中富含多種蛋白質(zhì)并促進(jìn)肺病的發(fā)生的發(fā)展,，是早期診斷肺病的有效途徑,。用于外泌體提取的體液收集注意事項(xiàng)：注意抗凝劑的選擇。

專利申請(qǐng)利用分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基來進(jìn)行體外培養(yǎng),，直接把外泌體從尿液中沉降下來,，無須分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基。人尿液來源細(xì)胞的外泌體的獲取方法,，是首先分離培養(yǎng)人尿液來源細(xì)胞并收集培養(yǎng)基,，將人尿液來源細(xì)胞的培養(yǎng)基通過0.22微米濾膜過濾，以去除大的細(xì)胞殘片以及其它雜質(zhì),；然后離心除去細(xì)胞器,，留取上清；再使用可截留100KD分子量的膜,，通過離心截留上清中的外泌體,，截留完成后，使用PBS對(duì)膜進(jìn)行洗脫即得到外泌體濃縮液,。外泌體（Exosome）發(fā)現(xiàn)于1986年,，是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結(jié)構(gòu)小體。合肥正規(guī)外泌體提取試劑廠家

對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng),，無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā),。武漢正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高,、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,，組分經(jīng)過優(yōu)化處理,，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清,、血漿,、尿液及其他體液（腦脊液、腹水,、羊水,、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取,，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項(xiàng)：1.對(duì)于待測(cè)樣品粘度過大時(shí),，可將樣本用4℃預(yù)冷的1×PBS緩沖液進(jìn)行等體積稀釋處理。2.當(dāng)血清,、血漿,、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時(shí),，可用4℃預(yù)冷的1×PBS進(jìn)行稀釋后再通過EPF柱離心,。3.針對(duì)外泌體標(biāo)志蛋白（CD63,CD9,CD81等）進(jìn)行Westernblot檢測(cè)，可以鑒定所提的外泌體,。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時(shí)以上才能獲得足夠的外泌體量,。武漢正規(guī)外泌體提取試劑產(chǎn)品介紹