膠原蛋白的應用:1.膠原天然的緊密的纖維結構,,使膠原材料顯示出很強的韌性和強度,,適用于薄膜材料的制備;2.大較膠原被用作制造腸衣等可食用包裝材料.其獨特之處是:在熱處理過程中.隨著水分和油脂的蒸發(fā)和熔化.膠原幾乎與肉食的收縮率一致,。而其他的可食用包裝材料還沒被發(fā)現(xiàn)具有這品質,;3.由于膠原分子鏈上含有大量的親水基團.所以與水結合的能力很強.這一性質使膠原在食品中可以用作填充劑和凝膠;4.膠原在酸性和堿性介質中膨脹,,這一性質也應用于制備膠原基材料的處理工藝中,。鼠尾膠原,是一種天然培養(yǎng)基,,它具有促進體外培養(yǎng)細胞(特別是上皮細胞)貼壁的作用,。石家莊鼠尾膠原推薦廠家
鼠尾膠原實驗應用:探討應用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原,,觀察全細胞膜片鉗實驗中,,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結果無鼠尾膠原時,,前庭毛細胞懸浮于外液,,不宜封接;有鼠尾膠原時,,前庭毛細胞貼附于培養(yǎng)皿底壁,,易于封接和長時間(約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用,。結論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉,。重慶鼠尾膠原價格加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
含細胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):準備好懸浮于培養(yǎng)液的細胞,并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻,。再加入23ul10xPBS或10x培養(yǎng)液,,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,,初次使用時需要用pH試紙測試),。加入760ul的細胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,,加入適當體積的細胞培養(yǎng)液,轉移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。
鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究,。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿(實驗組)和普通培養(yǎng)皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/LH2O2誘導,。24h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài),應用MTT比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài),流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達。結果與結論:兩組培養(yǎng)皿中,隨著過氧化氫濃度的增高,均可見細胞凋亡狀態(tài)明顯加重,細胞存活率及細胞內過氧化氫活力明顯下降,細胞凋亡率及細胞內丙二醛水平明顯增高,Bcl-2/Bax比值明顯降低,呈劑量依賴性,。鼠尾膠原醋酸溶解:將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,。
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無菌10×PBS,、無菌蒸餾水,、無菌1MNaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3)在冰上放置無菌管以收存膠原蛋白I,。4)在無菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL),。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無菌冰冷1MNaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10×PBS)—V(1MNaOH)4.5混合管中的物質并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計算體積,,混勻,,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時。6)使用時,,無菌條件下將溶液加入到細胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min,。自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞,細胞角蛋白18表達陽性,。無錫鼠尾膠原廠家批發(fā)價
在操作過程中要盡量保持低溫,。保存條件4℃保存,切勿凍存,,有效期一年,。石家莊鼠尾膠原推薦廠家
實驗應用:鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片,,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞,,培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結構,應用高速攝像技術測量纖毛擺動頻率.結果鼠尾膠原要平坦均勻,,平均厚度約為1mm,;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形,,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接,;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,,為今后研究鼻內用藥對纖毛清理功能的影響提供了良好的方法和途徑,。石家莊鼠尾膠原推薦廠家