鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用:鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用,。目的:建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果,。結(jié)果:自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞,,細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽(yáng)性,免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征,。結(jié)論:成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法,,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被,,特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦
鼠尾膠原蛋白的用途是什么:在食品加工領(lǐng)域,鼠尾膠原蛋白用于生產(chǎn)明膠并添加到布丁和棉花糖中,。它還可以當(dāng)作酸奶,,冰淇淋,果醬和奶油芝士等食品的增稠劑使用,。在一些低脂肪食品中,,它用于模仿全脂食品的感覺(jué)和質(zhì)地。它還用于生產(chǎn)膳食保健品,,據(jù)說(shuō)能讓手指甲和皮膚看起來(lái)更好,。此外,還有基于膠原蛋白的保健品,,可用于促進(jìn)關(guān)節(jié)健康,。在工業(yè)應(yīng)用方面,鼠尾膠原蛋白用于培養(yǎng)容器等實(shí)驗(yàn)室設(shè)備的內(nèi)部涂層,。設(shè)備上的膠原蛋白薄層通常被允許干燥,。它還可以用來(lái)制造一種凝膠,,可當(dāng)作懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)基。此外,,還可以把它當(dāng)膠水使用,。武漢鼠尾膠原廠家一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法,采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝,。
鼠尾膠原備用膠凝程序:1)在冰上放置以下物品:膠原蛋白I、無(wú)菌10×PBS,、無(wú)菌蒸餾水,、無(wú)菌1M NaOH。2)確定膠原蛋白I待使用溶液所需的較終濃度的體積,。3)在冰上放置無(wú)菌管以收存膠原蛋白I,。4)在無(wú)菌條件下執(zhí)行以下步驟。4.1加入10×PBS(終體積/10)mL4.2計(jì)算要使用的膠原蛋白I的體積(不要添加到管中直到步驟4.6為止)終體積x終膠原蛋白I濃度(mg/mL),。4.3向10×PBS溶液中加入(要加入的膠原體積×0.023)mL的無(wú)菌冰冷1M NaOH,。4.4向4.3溶液中加入下述體積的無(wú)菌冰冷蒸餾水:添加蒸餾水體積=V(終)—V(膠原蛋白)—V(10× PBS)—V(1M NaOH)4.5混合管中的物質(zhì)并放入冰中。4.6加入膠原蛋白I并計(jì)算體積,,混勻,,冰上備用。5)膠原蛋白I溶液可立即使用或在冰上放置2-3小時(shí),。6)使用時(shí),,無(wú)菌條件下將溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中37°C凝膠30min。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉,。
鼠尾膠原的提取步驟:離心膠原溶液(1600rpm,,15 min),取上清,;置300 目篩網(wǎng)于濾器(高壓滅菌)中,,抽濾上清 每600mL 上述粗提液中加100 mL 0.14 mol/L NaOH 溶液,離心(18000 rpm,,12 min),,棄上 清,留絮狀沉淀,;將絮狀沉淀轉(zhuǎn)移至錐形瓶中,,用0.1 mol/L 的醋酸溶液(200 mL)振搖促其重新 溶解。 膠原醋酸液在-70較低溫冰凍兩天,。 用一次性注射器戳洞封蓋冰凍好的含膠原培養(yǎng)皿保鮮膜,,真空冷凍干燥呈干棉花樣外觀(至少24 準(zhǔn)確稱取配置3mg/mL 的膠原醋酸液,,加入消毒過(guò)的攪拌子,冷房攪拌數(shù)日得絮狀膠原,。 10. 膠原蛋白凝膠制備預(yù)試- 膠原液:5*DMEM:血清:10*HEPES 液=6:2:1:1,,充分混勻; 0.5 NaOH調(diào)定pH 值至7.2(綜合DMEM顏色變化和pH試紙判斷,。鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)長(zhǎng)時(shí)程的記錄。
膠原蛋白是脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物支持結(jié)構(gòu)的主要組成,。在人的身體中這是皮膚,、筋、軟骨,、骨骼及結(jié)締組織的較主要的蛋白質(zhì),。膠原蛋白占人體蛋白質(zhì)總量的三分之一, 不論來(lái)源于哪一種動(dòng)物或哪一種組織的膠原都有許多共同特性,。氨基酸組成中約有三分之一為甘氨酸,,有脯氨酸和羥脯氨酸。根據(jù)其遺傳分子結(jié)構(gòu)遺傳基因的差別,,膠原蛋白分為20 幾個(gè)亞型,。但較為常見(jiàn)的為Ι、Π,、ΙΙΙ型膠原蛋白,,即間質(zhì)膠原蛋白。其中I型較為豐富且品質(zhì)優(yōu)良,。氯仿的量約為膠原溶液的10%,。不要晃動(dòng)或攪拌。石家莊鼠尾膠原直銷價(jià)
I型膠原蛋白(Collagen, Type I)結(jié)構(gòu)上是由2個(gè)α1鏈和1個(gè)α2鏈組成的異源多聚體,。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦
三維膠原的制備:鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上,,pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中,,在成膠過(guò)程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和,。需要的溶液 ( 均需要 無(wú)菌 、 預(yù)冷 ):10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水A.不含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,,1mg/ml三維膠為例):將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,,加入690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),,立即混勻。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家推薦
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