凍存細(xì)胞注意事項：冷凍保護(hù)劑可降低培養(yǎng)基的冰點,，并可減緩冷卻速度，較大降低冰晶形成的危險(冰晶可損傷細(xì)胞,，導(dǎo)致細(xì)胞死亡),。注：DMSO可促進(jìn)有機分子進(jìn)入組織。操作含DMSO的試劑時,，應(yīng)采用與此類物質(zhì)安全危害相適應(yīng)的設(shè)備和操作規(guī)范,，并應(yīng)按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)處置此類試劑。建議可使用廠商生產(chǎn)的無血清細(xì)胞凍存液,，使用方便，復(fù)蘇率高,。注意冷凍保護(hù)劑DMSO的品質(zhì)：DMSO應(yīng)為試劑級等級,，無菌且無色，以5-10ml小體積分裝,，4℃避光保存,，勿作多次解凍,。無血清快速細(xì)胞凍存液：含動物來源的血清成分，能夠有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,。昆明無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存液的作用是什么,？滲透性冷凍保護(hù)劑：可以滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是一些小分子物質(zhì),，主要包括甘油,、DMSO、乙二醇,、丙二醇,、乙酰胺、甲醇等,。非滲透性冷凍保護(hù)劑：不能滲透到細(xì)胞內(nèi),，一般是些大分子物質(zhì),，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）,、蔗糖、聚乙二醇,、葡聚糖,、白蛋白以及Hetastarch等。冷凍保護(hù)劑同溶液中的水分子結(jié)合,，發(fā)生水合作用,，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成，同時冷凍保護(hù)劑可以通過在細(xì)胞內(nèi)外維持一定的摩爾濃度,，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，使細(xì)胞免受溶質(zhì)的損傷,。滲透性冷凍保護(hù)劑的保護(hù)機制是在細(xì)胞冷凍懸液完全凝固之前,，滲透到細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,，降低細(xì)胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,，從而保護(hù)細(xì)胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷同時。細(xì)胞內(nèi)水分也不會過分外滲,，避免了細(xì)胞過分脫水皺縮,。長沙正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液將要凍存的細(xì)胞懸液，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù),，計數(shù)后離心,。

如何提高細(xì)胞凍存成功率：1.沒有控制好細(xì)胞的生長密度細(xì)胞的密度對細(xì)胞的生存質(zhì)量有著重要的影響，畢竟它們是一群又不能擠著了也不能孤獨的嬌貴寶寶,。密度過高會讓細(xì)胞沒有足夠的生存空間,，密度過低會讓細(xì)胞無法互相連接健康生長,。建議大家在細(xì)胞接種前，一定要調(diào)整好適合細(xì)胞生長的濃度,，提高細(xì)胞的存活率,。2.溫度控制不達(dá)標(biāo)慢凍快融是細(xì)胞凍存復(fù)蘇的中心關(guān)鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中,，都會要求嚴(yán)格的梯度降溫,，常見的是 -4℃ → -20℃ 至 - 40℃→ -80℃ → 液氮，一定要避免溫度原因?qū)е录?xì)胞自取消滅,；除非使用了成分經(jīng)過優(yōu)化,、經(jīng)過嚴(yán)格測試的凍存液，才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟,。保存的時候也要保證整個細(xì)胞都是處于液氮的液面下方,，避免溫度對細(xì)胞存活的影響。

冷凍速率：冷凍速率是指降溫的速度,，直接關(guān)系到冷凍效果,。冷凍速度不同，細(xì)胞內(nèi)水分向外流動的情況也不相同,，不同的冷凍速度既然能使細(xì)胞內(nèi)發(fā)生不同的生理變化,，也可以對細(xì)胞產(chǎn)生不同的損傷。超快速玻璃化冷凍對細(xì)胞存活來說是較為理想的冷凍方法,。細(xì)胞內(nèi)外呈玻璃化凝固,，無冰晶形成或形成很小的冰晶，對細(xì)胞膜和細(xì)胞器不致造成損傷,，細(xì)胞也不會在高濃度的溶質(zhì)中長時間暴露而受損,。 不同細(xì)胞的較適冷凍速率不同。小鼠骨髓干細(xì)胞,、酵母、人紅細(xì)胞的較適冷凍速率分別為1.6℃/min,、7℃/min和200℃/min,。細(xì)胞與細(xì)胞之間的較適冷凍速率可在1.6℃～300℃/min，故對一種細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存之前,，首先需要測定其較適冷凍速率,，以保證獲得較高的冷凍存活率。無血清細(xì)胞凍存液存儲條件：儲存于4℃以下,質(zhì)量保障期從產(chǎn)品的生產(chǎn)日期起,，為期兩年,。

細(xì)胞凍存，我們應(yīng)該注意哪些事項：1,、凍存液比例一般是培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1或5:4:1,；動物種屬的原代細(xì)胞凍存液可采用的比例是培養(yǎng)基：血清：DMSO=0:9:1,，即直接用血清重懸細(xì)胞再加入DMSO，盡管如此,，原代細(xì)胞的復(fù)蘇成活率還是很低,。2、有文獻(xiàn)表明,，細(xì)胞以l℃/min的速度冷凍存活率較髙,，因為這一速度可以很好的控制細(xì)胞內(nèi)部晶體的產(chǎn)生。我們實際操作不可能將速度控制的這么精確,，目前慣用的就是4℃30min,、-20℃ 1h30min、-80℃ 2h后轉(zhuǎn)入液氮中,。一些保護(hù)劑,，易于穿透細(xì)胞，避免細(xì)胞內(nèi)部水分子形成冰晶損傷細(xì)胞,。武漢無血清細(xì)胞凍存液廠家

同時血清中未知成分和細(xì)菌等傳染物質(zhì)會給凍存帶來影響與風(fēng)險,。昆明無血清細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存秘籍：冷凍保護(hù)劑冷凍保護(hù)劑對于冷凍過程中細(xì)胞發(fā)生的損傷較小化是必要的。較常見的冷凍保護(hù)劑是二甲基亞砜（DMSO）和甘油,。 DMSO（ATCC目錄號4-X,，5×5mL），常用濃度為5至10％（v / v）;較適濃度因細(xì)胞系而異,。注意： DMSO是一種非常強大的溶劑,，能夠迅速滲透完整的皮膚。因此避免直接接觸DMSO,，并妥善處理含有DMSO的廢物,。另外，選擇DMSO時,，確保使用無毒的產(chǎn)品,。ATCC出售的DMSO，已經(jīng)經(jīng)過完全測試,，以確保其無毒（ATCC目錄號4-X,，5×5mL）。甘油常用終濃度為5％至15％,。較佳濃度取決于細(xì)胞系,。通常，增加凍存培養(yǎng)基中的血清濃度來增加難以保存細(xì)胞的存活率,。有時使用高達(dá)90％至95％的血清濃度（無培養(yǎng)基,，*血清加上低溫保護(hù)劑）。A. 用凍存培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，使較終細(xì)胞濃度達(dá)到每毫升2-5百萬個活細(xì)胞,。B. 在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞名稱,，編號和凍存日期等信息。然后將1.0到1.8毫升的細(xì)胞懸液加入到細(xì)胞凍存管中并密封,。昆明無血清細(xì)胞凍存液