1983年,,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發(fā)現,,1987年Johnstone將其命名為“exosome”,。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體,。其主要來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中,。所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,,且外泌體天然存在于體液中,,包括血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁中,。有關他們分泌和攝取及其組成,、“運載物”和相應功能的精確分子機制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,,參與細胞間通訊,,對外泌體的研究興趣日益增長,,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。如何高效地提取外泌體是實現這項新興液體活檢技術臨床常規(guī)化應用的關鍵超離法是常用的外泌體純化手段,,采用低速離心,、高速離心交替進行,可分離到大小相近的囊泡顆粒,。金華外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
外泌體鑒定:外泌體分離之后,,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,,多角度進行鑒定,。l透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形,。l納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態(tài),、檢測速度快,,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。lWesternblot分子標志物檢測:外泌體標志蛋白包括四跨膜蛋白家族,,如CD9,、CD63和CD81;細胞質蛋白,,如肌動蛋白(Actin)和鈣磷脂結合蛋白(Annexins),;使用可截留100KD分子量的膜,通過離心截留上清中的外泌體,,截留完成后鄭州外泌體提取試劑直銷廠家外泌體的特殊結構和功能,,使得它具有潛在的應用價值,可以作為診斷多種疾病的生物指標,。
外泌體(exosome),,特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中?,F已證實可以分泌外泌體的細胞有:肥大細胞、淋巴細胞,、樹突狀細胞,、瘤細胞、間充質干細胞等,。外泌體在免疫中抗原呈遞,、瘤的生長與遷移、組織損傷的修復等生理病理上起著重要的作用,。同時,,不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,,可作為疾病診斷的生物標志物。細胞外囊泡是蛋白質,、mRNA,、miRNA和脂質運輸來完成細胞間通訊通路的重要媒介,根據它們的大小和發(fā)生分為三類,,包括外泌體,、微泡和凋亡小體。
外泌體(Exosomes)是細胞分泌到胞外的一種囊泡(ExtracellularVesicles,,EVs),,其大小為30-150nm,,具有雙層膜結構和茶托狀形態(tài),,含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),,參與細胞間的分子傳遞,。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液,、唾液,、尿液、乳汁等,,同時也存在于組織樣本中,,如腦組織、肌肉組織,、脂肪組織等,。腦組織分離方法簡述:將腦組織剪成薄片,放入離心管中加上消化液進行消化,,經水浴,、反復輕輕上下顛倒,再用移液間斷緩慢吹吸至消化結束,。隨后加入培養(yǎng)基于消化液中,,混勻,置于冰上,。再進行一系列的差速超速離心過程,,包括除雜、濾膜過濾,、超離等,。較后用PBS重懸外泌體,用重懸后的外泌體進行下面的透射電鏡(TEM),、納米粒徑追蹤分子(NTA)和markerWB鑒定,。來源于細胞內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中外泌體提取:差速離心,。差速離心仍然是較常見的外泌體分離技術之一,。
外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒,而傳統超速離心方法步驟繁瑣,、硬件要求高,、操作難度大。李記生物自主開發(fā)的外泌體快速提取試劑盒,,組分經過優(yōu)化處理,,適用于細胞培養(yǎng)上清液、血清,、血漿,、尿液及其他體液(腦脊液、腹水,、羊水,、乳汁以及唾液等)中的外泌體提取,并搭配純化過濾裝置,,可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒,。注意事項:1.對于待測樣品粘度過大時,可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理,。2.當血清,、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高,,收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時,,可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。外泌體的提取,、分離方法:尺寸排阻色譜法和超濾法,。重慶外泌體提取試劑生產廠家
用于外泌體提取的體液收集注意事項:避免劇烈搖晃。金華外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡,,直徑約為30-200nm,,密度在1.13-1.21g/ml,具有杯狀形態(tài),、雙層膜結構,,天然存在于血液、尿液,、唾液,、母乳和細胞培養(yǎng)基等生物體液中。包括瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞(免疫細胞,、神經細胞,、干細胞),,都可以產生并釋放exosome。Exosome內含有與細胞來源相關的蛋白質rRNA和microRNA,,Exosome可通過細胞膜受體直接受體細胞,,也可運輸蛋白質、mRNA,、miRNA,、lncRNA、circRNA,,甚至細胞器進入受體細胞,,參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答,、炎癥反應,、血管生成、凋亡,、凝血和廢物處理等生理過程發(fā)揮關鍵作用,,不同細胞來源的exosome所含有的RNA和蛋白成分不盡相同,,可作為多種疾病的早期診斷標記物,,也能作為靶向藥物的載體進行疾病金華外泌體提取試劑廠家批發(fā)價
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