鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中,。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試),。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉,、碳酸鈉等,。貴陽正規(guī)鼠尾膠原平均價(jià)格

膠原蛋白的適用征狀：1、由于工作勞累,，睡眠不足形成的皮膚晦暗無光,、發(fā)黃、皮膚彈性差等皮膚衰老的不良癥狀,。2,、由于年齡、太陽輻射因素引起的皮膚松弛,、下垂,、皺紋、干燥等皮膚衰老現(xiàn)象,。3,、由于體內(nèi)異常黑色素分泌旺盛，大量沉積皮膚表面,，肌膚不能及時(shí)代謝出異常黑色素,，形成各種色斑。4,、由于長期戶外活動(dòng)及皮膚保養(yǎng)不當(dāng)使膚質(zhì)受到損傷,，過早出現(xiàn)細(xì)紋,皮膚干燥、脫皮,、,、毛孔粗大等不良癥狀。5,、由于內(nèi)分泌功能紊亂,，皮膚膚質(zhì)差、皮膚發(fā)油,、發(fā)暗,，易長青春痘留下的色印、色素沉著等,。6,、由于生活無規(guī)律,吸煙等因素,造成的黑眼圈,眼袋等問題。7.長期電腦旁工作,，電腦輻射造成脫發(fā),，內(nèi)分泌紊亂問題。貴陽正規(guī)鼠尾膠原推薦廠家稱取胃蛋白酶加入到膠原溶脹液中,。

鼠尾膠原類似物的建立：目的：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法,。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,，制備鼠尾膠原，將鼠尾膠原溶液,、濃縮培養(yǎng)基,、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好,，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力,。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ),；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：三維膠原的制備 鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上,， pH 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度 1-2mg/ml,。膠原蛋白溶解于 0.006mol/L 乙酸 中，在成膠過程中需要加入 0.06體積的 0.1mol/L NaOH 來中和,。 需要的溶液 （均需要無菌,、 預(yù)冷） 10mg/L 酚紅用于pH 指示） 0.1mol/LNaOH，0.1mol/L乙酸(一 般不用),，雙蒸水 200ul鼠尾膠原蛋白 型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,，加入 690ul H2O 12ul0.1mol/L NaOH 12ul0.1mol/LNaOH 加到膠原溶液中， 會(huì)由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的 膠原凝結(jié)） 立即混勻,。再加入 100ul 10PBS 10培養(yǎng)液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后 pH 左右，如果PBS 或培養(yǎng)液中沒有加 酚紅,，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測(cè)試),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,，并且制作簡(jiǎn)便,，成本低廉。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用,。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：通過醋酸抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等 步驟制備的,。鼠尾膠原蛋白可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿,，培養(yǎng)一些在普通細(xì)胞 培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細(xì)胞。也可用于制備三維膠,，模擬真實(shí)的生長環(huán)境,， 使細(xì)胞在三維環(huán)境中生長,。 1,，在使用鼠膠原蛋白 型包被的細(xì)胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12 細(xì)胞的 貼壁和生長,。 1mg/ml濃度以上，pH 左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠,，檢查到 NIH-3T3 細(xì)胞在三維膠內(nèi)正常生長,、PC-12 細(xì)胞在三維膠表面 正常生長。 使用方法： 1,、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度： 1-5ug/cm 0.012mg/ml,。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間,。杭州重慶鼠尾膠原

在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,。貴陽正規(guī)鼠尾膠原平均價(jià)格

詳細(xì)步驟如下：1.75％酒精浸泡大鼠尾巴30min；2.將尾巴剪開,、去掉皮毛,，并剪成小段（3cm左右），抽出銀色的尾鍵,；3.把剪碎的尾鍵置于150ml,，0.1％消過毒的醋酸中，4℃放置,，并不時(shí)振蕩,；4.48h后取上清，4000轉(zhuǎn)離心30min后,，取上清,；5.分裝上清（鼠尾膠）4度（或-20度）保存。有時(shí)可繼續(xù)向4,。中沉淀中加入10－20ml醋酸,，重復(fù)以上步驟，以制備更多的鼠尾膠,。在使用時(shí),，先將冰存的膠原液在室溫下解凍，再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿：1）用吸管吸取膠原液,，在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液,。2）若包被的是培養(yǎng)瓶，可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻,。讓氨氣充入瓶內(nèi)后,，即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話,，可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),，將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi)，蓋緊飯盒蓋,，四周用封口膠封死,。貴陽正規(guī)鼠尾膠原平均價(jià)格