鼠尾膠原類似物的建立：目的：探尋建立類似物的培養(yǎng)方法。方法：原代培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞,，制備鼠尾膠原,，將鼠尾膠原溶液、濃縮培養(yǎng)基,、NaOH溶液和以血清重懸的成纖維細(xì)胞溶液在適當(dāng)?shù)谋壤禄旌虾笮纬赡z構(gòu)建類似物,。結(jié)果：形成的類似物中成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好，并且組織塊具有一定彈性和抗拉伸能力,。結(jié)論：①利用鼠尾膠原可以構(gòu)建類似物,，該模型是進(jìn)行皮膚部位型培養(yǎng)和制作復(fù)合皮的關(guān)鍵與基礎(chǔ)；②成纖維細(xì)胞膠原凝膠復(fù)合物有著良好的生物學(xué)特性,，它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型,。膠原蛋白是一種蛋白質(zhì)，能幫助連接皮膚,，骨頭和肌腱等身體組織。金華正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說明：含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升,，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,，并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中,，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)）,，立即混勻,。再加入23ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右,，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用pH試紙測試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,，并且制作簡便,，成本低廉。杭州鼠尾膠原直銷廠家加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面,。

鼠尾膠原蛋白：膠原蛋白（Collagen）是結(jié)締組織和內(nèi)臟部位外基質(zhì)的主要成分，但在皮膚,、肌腱,、骨骼中分布較為普遍。膠原蛋白在結(jié)構(gòu)和遺傳學(xué)上被分為不同類型,，I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體,，在37℃中性條件下可形成3股螺旋結(jié)構(gòu)，被普遍用于多種細(xì)胞的培養(yǎng)基質(zhì),，如肝細(xì)胞,、纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié),、雪旺氏細(xì)胞等,。另外，I型膠原蛋白在細(xì)胞生長,、分化,、遷移和組織形態(tài)的發(fā)生等方面也具有重要應(yīng)用。膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,，可用于制備三維膠,，模擬細(xì)胞真實的生長環(huán)境；也可以用于包被組織培養(yǎng)皿表面，提高細(xì)胞表面粘附性,，比如培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞,、肝細(xì)胞等原代細(xì)胞。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后,，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi),。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡,。 B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過來把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中,，會由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即 混勻,。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液,，混勻(混勻后pH 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,，初次使用時需要用 pH 試紙測試),。加入 760ul 的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中,。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后,，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。 注意事項 型在室溫下pH 中性時可迅速成膠,，在操作過程中要 盡量保持低溫。鼠尾肌腱膠原蛋白I（rat tail tendon collagen type I）根據(jù)Birkedal-Hansen方法,，經(jīng)過醋酸（HAc）抽提,、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備所得,。鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過濾的方法無菌化,。

鼠尾膠原包被培養(yǎng)板：胎干細(xì)胞在體外可誘導(dǎo)分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞,進(jìn)而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細(xì)胞來源之一。目的:探討建立定向誘導(dǎo)人胚胎干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的方法,。方法:在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)人胚胎干細(xì)胞H1,將H1細(xì)胞團(tuán)塊轉(zhuǎn)移到鼠尾膠原包被的培養(yǎng)板,貼壁24-48h后,培養(yǎng)基換為含不同輔助因子和內(nèi)皮細(xì)胞生長添加劑的EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基,。結(jié)果與結(jié)論:①在EGM-2內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基誘導(dǎo)下,細(xì)胞逐步表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記基因VEGFR-2、PECAM1,、vWF,、CD34、VE-cadherin,、GATA-2,。②分化細(xì)胞表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記VE-cadherin、CD31,。③分化細(xì)胞具有吞噬低密度脂蛋白功能,。說明將人胚胎干細(xì)胞接種在鼠尾膠原包被培養(yǎng)板上,通過EGM-2內(nèi)皮培養(yǎng)體系誘導(dǎo),可直接分化為功能性血管內(nèi)皮細(xì)胞,。為研究胞外基質(zhì)對誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞分化的作用以及相關(guān)信號分子機制打下了基礎(chǔ)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便,，成本低廉,。鼠尾膠原醋酸溶解：稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。蕪湖武漢鼠尾膠原

鼠尾膠原醋酸溶解：不要晃動或攪拌,。金華正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹

鼠尾膠原在心肌細(xì)胞氧化損傷中的保護(hù)作用：膠原蛋白具有抗氧化作用,，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進(jìn)細(xì)胞貼壁和支架構(gòu)建，對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究,。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細(xì)胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中，并且均用0,，10,，100μmol/L H2O2誘導(dǎo)。24 h后,，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細(xì)胞的形態(tài),，應(yīng)用MTT 比色法檢測心肌細(xì)胞存活率，TUNEL 法檢測心肌細(xì)胞凋亡形態(tài),，流式細(xì)胞技術(shù)檢測心肌細(xì)胞凋亡率,，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,，Western-Blot 檢測凋亡蛋白Bax,、Bcl-2的表達(dá)。金華正規(guī)鼠尾膠原產(chǎn)品介紹