培養(yǎng)基中谷氨酰胺作用及使用方法?幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求,,細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),,在缺少谷氨酰胺時(shí),細(xì)胞生長不良而死亡,。所以,,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,,應(yīng)置-20℃ 冰凍保存,,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基 4℃冰箱儲存兩周以上時(shí),,應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺,。GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I,?這個(gè)二肽有多穩(wěn)定,?GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,,其不穩(wěn)定的 alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù),。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用,。GlutaMAX-I 二肽非常穩(wěn)定,,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有較小的降解,,如果在相同條件下,,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基N 韋榮氏球菌培養(yǎng)基基礎(chǔ) 依姆歇涅茨基纖維素培養(yǎng)基 奧曼梁斯基培養(yǎng)基 赫奇遜瓊脂培養(yǎng)基,。植物組織培養(yǎng)基 MS 大量元素與微量元素
什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅,?酚紅在培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑:中性時(shí)為紅色,酸性時(shí)為黃色,,堿性時(shí)為紫色,。酚紅本身對生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生影響,可以通過純化技術(shù)去除,,但酚紅在無血清培養(yǎng)基可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡,,影響細(xì)胞生長,當(dāng)然這種作用能被血清所中和或減輕。酚紅并不是培養(yǎng)基中必需的一種成分,,很多國外的疫苗或抗體生產(chǎn)企業(yè)在生產(chǎn)過程中都使用無酚紅培養(yǎng)基,。研究表明,酚紅可以模擬固醇類的作用,。為避免固醇類反應(yīng),,培養(yǎng)細(xì)胞,尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),,用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時(shí),,不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。CYS培養(yǎng)基添加劑THB培養(yǎng)基基礎(chǔ) BETA-SSA瓊脂基礎(chǔ) 輕唾桿菌肽瓊脂(MSBA)基礎(chǔ) 屎腸球菌選擇性培養(yǎng)基。
細(xì)菌培養(yǎng)基之牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基:牛肉膏0.3g ,,蛋白胨1.0g,,氯化鈉0.5g,瓊脂1.5g,,水100ml在燒杯內(nèi)加水100ml,,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,,用蠟筆在燒杯外作上記號后,,放在火上加熱。待燒杯內(nèi)各組分溶解后,,加入瓊脂,,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補(bǔ)足失水,,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調(diào)整pH值到7.2-7.6,,分裝在各個(gè)試管里,加棉花塞,,用高壓蒸汽滅菌:1.05千克每平方厘米,、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基:取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,,用刀細(xì)細(xì)剁成肉末后,,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號,,煮沸,,轉(zhuǎn)用文火燉2小時(shí)。過濾,,濾出的肉末干燥處理,,濾液pH值調(diào)到7.5左右,。每支試管內(nèi)加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,滅菌,,備用,。
細(xì)菌培養(yǎng)基之面粉瓊脂培養(yǎng)基:面粉60g,瓊脂20g,,水1000ml把面粉用水調(diào)成糊狀,,加水到500ml,放在文火上煮30分鐘,。另取500ml水,,放入瓊脂,加熱煮沸到溶解后,,把兩液調(diào)勻,補(bǔ)充水分,,調(diào)整pH值到7.4,,分裝,滅菌,,備用,。微藻培養(yǎng)基,BG-11培養(yǎng)基:NaNO3 1.5g,,K2HPO4 ·3H2O0.04g,,MgSO4·7H2O0.075g,CaCl2 ·2H2O0.036g Citric Acid (檸檬酸)0.006g,,F(xiàn)erric ammonium citrate(檸檬酸鐵銨0.006g,,EDTA (dinatrium-salt) 0.001g,Na2CO3 0.02g,,A5 + Co solution * (A5溶液1000×)1ml Distilled Water (蒸餾水)919ml,。
李氏瓊脂 Herrold’s 卵黃瓊脂基礎(chǔ) 指示選指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ) 肝浸液肉湯 肝浸液瓊脂 胰膘肉湯 胰膘瓊脂。
培養(yǎng)基分類有哪些,?營養(yǎng)缺陷型:野生型菌株經(jīng)過人工誘變或者自然突變失去合成某種營養(yǎng)(氨基酸,,維生素,核酸等)的能力,,只有在基本培養(yǎng)基中補(bǔ)充所缺乏的營養(yǎng)因子才能生長,,稱為營養(yǎng)缺陷型(auxotroph)。營養(yǎng)缺陷型是一種生化突變株,,它的出現(xiàn)是由基因突變引起的,。遺傳信息的載體是一系列為酶蛋白編碼的核酸系列,如果核酸系列中某堿基發(fā)生突變,,由該基因所控制的酶合成受阻,,該菌株也因此不能合成某種營養(yǎng)因子,使正常代謝失去平衡。NGKG瓊脂基礎(chǔ) 酪蛋白瓊脂 酚紅葡萄糖肉湯 溶菌酶營養(yǎng)肉湯基礎(chǔ) 胰酪胨大豆多粘菌素肉湯(TSPB)基礎(chǔ),。蛋白胨氯化鈉溶液
羧甲基纖維素鈉(CMC)培養(yǎng)基 改良斯蒂芬遜培養(yǎng)基 HP培養(yǎng)基基礎(chǔ) 9K培養(yǎng)基 BG11瓊脂培養(yǎng)基,。植物組織培養(yǎng)基 MS 大量元素與微量元素
1951年厄爾開發(fā)了供動物細(xì)胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基的種類相當(dāng)多,。合成培養(yǎng)基成分已知,,便于對實(shí)驗(yàn)條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比,,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,,因此,細(xì)胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,,以克服合成培養(yǎng)基的不足,。普遍的作法是加入小牛血清。動物血清成分復(fù)雜,,各種生物大小分子混合在一起,,有些成分至今尚未搞清楚。血清對細(xì)胞生長很有效,,但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離,、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質(zhì)量的動物血清來源有限,,成本高,,限制了它的大量使用。無血清培養(yǎng)基不加動物血清,,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長有效因子等,。植物組織培養(yǎng)基 MS 大量元素與微量元素
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