培養(yǎng)基中谷氨酰胺作用及使用方法?幾乎所有的細(xì)胞對(duì)谷氨酰胺有較高的要求,細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),,在缺少谷氨酰胺時(shí),,細(xì)胞生長(zhǎng)不良而死亡。所以,,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20℃ 冰凍保存,,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基 4℃冰箱儲(chǔ)存兩周以上時(shí),,應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺,。GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I,?這個(gè)二肽有多穩(wěn)定,?GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,,其不穩(wěn)定的 alpha-氨基用L-丙氨酸來保護(hù),。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用,。GlutaMAX-I 二肽非常穩(wěn)定,,即使在121磅滅菌20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有較小的降解,,如果在相同條件下,,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。培養(yǎng)基還可以根據(jù)所需生長(zhǎng)的微生物類別,,加入特定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),,例如血清,、血紅蛋白等等。溴甲酚紫瓊脂(BPA)
以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL,,維生素100×母液20mL,,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,,配制得MS培養(yǎng)基后,,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL,。然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0,。加入14g瓊脂,,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,,然后用蒸餾水定容至終體積2L,,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。改良McBride瓊脂基礎(chǔ)(MMA)黃色布氏菌芽孢桿菌常用的培養(yǎng)基為營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基,。
氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分,,氨基酸中有12種是細(xì)胞本身不合成的,必須由培養(yǎng)液提供,。水解乳蛋白,、膠原是另外兩種較好的天然培養(yǎng)基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物,,呈蛋黃色粉末狀,,富含氨基酸。一般配制成0.5%溶液,,微酸性,。膠原是從動(dòng)物真皮中提取的,具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長(zhǎng)的作用,。特殊培養(yǎng)基:包括厭氧培養(yǎng)基和細(xì)菌L型培養(yǎng)基等,。前者是培養(yǎng)專性厭氧菌的培養(yǎng)基,除含營(yíng)養(yǎng)成分外,,還加入還原劑以降低培養(yǎng)基的氧化還原電勢(shì),,如皰肉培養(yǎng)基、巰基乙醇酸鈉培養(yǎng)基等,。后者是針對(duì)細(xì)胞壁缺損的細(xì)菌L型,,由于胞內(nèi)滲透壓較高,,故培養(yǎng)基必須采用高滲低瓊脂培養(yǎng)基。
細(xì)菌培養(yǎng)基之根瘤菌培養(yǎng)基:葡萄糖10g,,磷酸氫二鉀0.5g,,碳酸鈣3g,硫酸鎂0.2g,,酵母粉0.4瓊脂20g,,水1000ml,1%結(jié)晶紫溶液1ml,。先把瓊脂加水煮沸溶解,,然后分別加入其他組分,攪拌使溶解后,,分裝,,滅菌,備用,。放線菌培養(yǎng)基:(1)淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號(hào)培養(yǎng)基)可溶性淀粉2.0g,,硝酸鉀0.1g,磷酸氫二鉀0.05g,,氯化鈉0.05g,,硫酸鎂0.05g,硫酸亞鐵0.001g,,瓊脂2g,水100ml,。先把淀粉放在燒杯里,,用5ml水調(diào)成糊狀后,倒入95ml水,,攪勻后加入其他藥品,,使它溶解。在燒杯外做好記號(hào),,加熱到煮沸時(shí)加入瓊脂,,不停攪拌,待瓊脂完全溶解后,,補(bǔ)足失水,。調(diào)整pH值到7.2-7.4,分裝后滅菌,,備用,。無機(jī)培養(yǎng)基則為化學(xué)合成培養(yǎng)基,其用途從分離細(xì)菌到研究微生物生理生化特性都普遍應(yīng)用,。
bFGF是一個(gè)肝素結(jié)合的多膚類絲裂源,,普遍分布于各種組織中,。bFGF 是一種重要的細(xì)胞增殖分化調(diào)節(jié)劑,可刺激多種細(xì)胞的增殖,。有研究發(fā)現(xiàn)它對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞也有促增殖作用,。bFGF 主要是與細(xì)胞膜上FGF受體結(jié)合發(fā)揮作用,刺激與增殖有關(guān)的基因表達(dá),。Thomson 等認(rèn)為,,像其他體外培養(yǎng)的人體細(xì)胞一樣,hES 細(xì)胞要求 bFGF 的存在以促進(jìn)增殖,。同理EGF(上皮生長(zhǎng)因子) , 是人體內(nèi)的一種活性物質(zhì),,由53個(gè)氨基組成的活細(xì)胞,藉由刺激表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體之酪氨酸磷酸化,,達(dá)到修補(bǔ)增生肌膚表層細(xì)胞,,據(jù)說對(duì)受傷、受損之表皮肌膚擁有很好的療效,,其較大特點(diǎn)是能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化,。所以加入它們都是促進(jìn)細(xì)胞增殖的。孟德爾-韋伯利法可以計(jì)算培養(yǎng)基的可利用能量,。GC瓊脂基礎(chǔ)
制備培養(yǎng)基需要考慮生長(zhǎng)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng),、酸堿度和水分含量等因素。溴甲酚紫瓊脂(BPA)
天然培養(yǎng)基:天然培養(yǎng)基是指一類利用動(dòng)物,、植物或微生物體包括其提取物制成的培養(yǎng)基,。例如。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基,、麥芽汁培養(yǎng)基和LB培養(yǎng)基等,。常用的天然有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括豆芽汁、玉米粉,、土壤浸液,、麩皮、牛奶,、血清,、椰子汁等。天然培養(yǎng)基成本較低,,除在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)常使用外,,也適于用來進(jìn)行工業(yè)上大規(guī)模的微生物發(fā)酵生產(chǎn)。組合培養(yǎng)基:合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成,、人工設(shè)計(jì)而配制的培養(yǎng)基。例如,,高氏1號(hào)培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基等,。合成培養(yǎng)基有一定的配方,,配制合成培養(yǎng)基時(shí)重復(fù)性強(qiáng),但與天然培養(yǎng)基相比其成本較高,,微生物在其中生長(zhǎng)速度較慢,,一般適于在實(shí)驗(yàn)室用來進(jìn)行有關(guān)微生物營(yíng)養(yǎng)需求、代謝,、分類鑒定,、生物量測(cè)定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作,。溴甲酚紫瓊脂(BPA)
上海瑞楚生物科技有限公司在培養(yǎng)基,,菌種,標(biāo)準(zhǔn)品,,酶一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位,,無論是產(chǎn)品還是服務(wù),其高水平的能力始終貫穿于其中,。瑞楚生物是我國(guó)化工技術(shù)的研究和標(biāo)準(zhǔn)制定的重要參與者和貢獻(xiàn)者,。瑞楚生物致力于構(gòu)建化工自主創(chuàng)新的競(jìng)爭(zhēng)力,多年來,,已經(jīng)為我國(guó)化工行業(yè)生產(chǎn),、經(jīng)濟(jì)等的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。