在培養(yǎng)基中加人某種抑制劑和指示劑,,抑制某些細菌生長,,促進目的菌的繁殖,,并使所生長的細菌菌落具有一定特征,以助鑒別挑選,,這類培養(yǎng)基稱為選擇性鑒別培養(yǎng)基,。如SS瓊脂,在該培養(yǎng)基配方中含有乳糖(反應底物),、中性紅和檸檬酸鐵銨(指示劑),、燦爛綠及膽鹽等(抑菌劑)。燦爛綠和膽鹽等抑菌劑能抑制革蘭氏陽性菌及部分大腸埃希菌的生長,,而對沙門菌及志賀菌基本無影響,,而且大腸埃希菌能發(fā)酵乳糖產酸,使菌落變紅色,,沙門菌和志賀菌不發(fā)酵乳糖,,其菌落為無色。如細菌產生硫化氫,,則與檸檬酸鐵銨反應生成硫化亞鐵沉淀,,菌落中心呈黑色或褐色。以此達到鑒別的目的。制備培養(yǎng)基需要考慮生長細胞所需的營養(yǎng),、酸堿度和水分含量等因素,。Stuart運送培養(yǎng)基(含活性碳)
細菌培養(yǎng)基之根瘤菌培養(yǎng)基:葡萄糖10g,磷酸氫二鉀0.5g,,碳酸鈣3g,,硫酸鎂0.2g,酵母粉0.4瓊脂20g,,水1000ml,,1%結晶紫溶液1ml。先把瓊脂加水煮沸溶解,,然后分別加入其他組分,,攪拌使溶解后,分裝,,滅菌,,備用。放線菌培養(yǎng)基:(1)淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號培養(yǎng)基)可溶性淀粉2.0g,,硝酸鉀0.1g,,磷酸氫二鉀0.05g,氯化鈉0.05g,,硫酸鎂0.05g,,硫酸亞鐵0.001g,瓊脂2g,,水100ml,。先把淀粉放在燒杯里,用5ml水調成糊狀后,,倒入95ml水,,攪勻后加入其他藥品,使它溶解,。在燒杯外做好記號,,加熱到煮沸時加入瓊脂,不停攪拌,,待瓊脂完全溶解后,,補足失水。調整pH值到7.2-7.4,,分裝后滅菌,備用,。Fraser肉湯增菌液基礎生長細胞需要的營養(yǎng)物質包括碳源,、氮源、微量元素和維生素等。
細菌培養(yǎng)基之牛肉膏瓊脂培養(yǎng)基:牛肉膏0.3g ,,蛋白胨1.0g,,氯化鈉0.5g,瓊脂1.5g,,水100ml在燒杯內加水100ml,,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,,用蠟筆在燒杯外作上記號后,,放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解后,,加入瓊脂,,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水,,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到7.2-7.6,,分裝在各個試管里,加棉花塞,,用高壓蒸汽滅菌:1.05千克每平方厘米,、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養(yǎng)基:取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,,用刀細細剁成肉末后,,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號,,煮沸,,轉用文火燉2小時。過濾,,濾出的肉末干燥處理,,濾液pH值調到7.5左右。每支試管內加入10毫升肉湯和少量碎末狀的干牛心,,滅菌,,備用。
要獲得微生物純培養(yǎng),,必須避免雜菌污染,,因此對所用器材及工作場所進行消毒與滅菌。對培養(yǎng)基而言,,更是要進行嚴格的滅菌,。對培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2,,121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的,。在高壓蒸汽滅菌過程中,,長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞,如使糖類物質形成氨基糖,、焦糖,,因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2,112.6℃15-30分鐘進行滅菌,,某些對糖類要求較高的培養(yǎng)基,,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合,。致病菌常用的培養(yǎng)基包括營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基,、馬鈴薯葡萄糖瓊培養(yǎng)基。
培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內,,以滿足不同類型微生物的生長繁殖或產生代謝產物,。各類微生物生長繁殖或產生代謝產物的較適pH條件各不相同,一般來講,,細菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內生長,,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長。值得注意的是,,在微生物生長繁殖和代謝過程中,,由于營養(yǎng)物質被分解利用和代謝產物的形成與積累,會導致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化,,若不對培養(yǎng)基pH條件進行控制,,往往導致微生物生長速度下降或(和)代謝產物產量下降。因此,,為了維持培養(yǎng)基pH的相對恒定,,通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑,常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽(如KH2PO4和K2HPO4)組成的混合物,。K2HPO4溶液呈堿性,,KH2PO4溶液呈酸性,兩種物質的等量混合溶液的pH為6.8,。當培養(yǎng)基中酸性物質積累導致H+濃度增加時,,H+與弱堿性鹽結合形成弱酸性化合物,培養(yǎng)基pH不會過度降低,;如果培養(yǎng)基中OH-濃度增加,,OH-則與弱酸性鹽結合形成弱堿性化合物,培養(yǎng)基pH也不會過度升高,。經過無菌處理的培養(yǎng)基能保證無細菌污染,。植物組織培養(yǎng)基 MS 大量元素
常見的培養(yǎng)基有LB培養(yǎng)基,YPD培養(yǎng)基,,M9培養(yǎng)基和DMEM培養(yǎng)基等,。Stuart運送培養(yǎng)基(含活性碳)
培養(yǎng)基分類有哪些,?營養(yǎng)缺陷型:野生型菌株經過人工誘變或者自然突變失去合成某種營養(yǎng)(氨基酸,維生素,,核酸等)的能力,只有在基本培養(yǎng)基中補充所缺乏的營養(yǎng)因子才能生長,,稱為營養(yǎng)缺陷型(auxotroph),。營養(yǎng)缺陷型是一種生化突變株,它的出現(xiàn)是由基因突變引起的,。遺傳信息的載體是一系列為酶蛋白編碼的核酸系列,,如果核酸系列中某堿基發(fā)生突變,由該基因所控制的酶合成受阻,,該菌株也因此不能合成某種營養(yǎng)因子,,使正常代謝失去平衡。Stuart運送培養(yǎng)基(含活性碳)
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