在培養(yǎng)基中加入 HEPES 有何好處?培養(yǎng)基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽,它可提供營養(yǎng),,但卻在生理 pH 條件下會降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強(qiáng)的緩沖劑,,能使細(xì)胞培養(yǎng)基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強(qiáng),。HEPES溶液:是一種弱酸,,中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸,主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動,。在開放式培養(yǎng)條件下,,觀察細(xì)胞時(shí)培養(yǎng)基脫離了 5%CO2 的環(huán)境,CO2 氣體迅速逸出,,pH迅速升高,,若加了HEPES,,此時(shí)可以維持 pH7.0 左右,。一般在進(jìn)行克隆化培養(yǎng)時(shí)要添加HEPES。神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)的過程中能用到,。培養(yǎng)基根據(jù)其組成,、用途、酸堿度等不同因素分類,,如營養(yǎng)瓊脂,、LB培養(yǎng)基,、麥康凱培養(yǎng)基等。pH7.8磷酸鹽緩沖液
還有一些鑒別性培養(yǎng)基,,是利用細(xì)菌特有的各種酶系統(tǒng),,能分解利用各種特定的糖、醇,、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見物質(zhì),,依此進(jìn)行細(xì)菌的鑒別,例如常用的生化培養(yǎng)基,。用于細(xì)菌生化特性試驗(yàn)的培養(yǎng)基特點(diǎn)是在無糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì),并加人指示劑,,細(xì)菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應(yīng)結(jié)果,,均通過指示劑顯示出來。此類培養(yǎng)基為生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)基,。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗(yàn)培養(yǎng)基的某些成分受高溫,、pH等諸多因素的影響,在配制和使用時(shí),,應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況嚴(yán)格掌握,,防止有效成分被破壞,以保障其使用效果,。放線菌酮溶液培養(yǎng)基類型和配方可以根據(jù)需要進(jìn)行定制,以滿足特定的實(shí)驗(yàn)需求,。
培養(yǎng)基有天然,、人工兩種,。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基,,以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)調(diào)pH至7.2-7.4,,若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8,則大多數(shù)細(xì)胞不能生長,。RPMI-1640不耐高壓滅菌,,使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。培養(yǎng)中常使用小牛血清(或胎牛血清),。血清亦不能高壓滅菌,無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體,,置4℃冰箱存放待用,。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類,、時(shí)間而定,一般用10—15%,。由于血清成分復(fù)雜,、條件不易控制,可選用無血清培養(yǎng)基,。
以MS培養(yǎng)基母液為基礎(chǔ),,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,,微量元素100×母液20mL,,鐵鹽100×母液20mL,,維生素100×母液20mL,,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,,配制得MS培養(yǎng)基后,,再加入0.5mg·L-1的BA8mL,,0.5mg·L-1的NAA8mL。然后加入實(shí)際配制培養(yǎng)基體積約2/3-3/4的蒸餾水,,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl調(diào)整pH值至5.8-6.0,。加入14g瓊脂,,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,,然后用蒸餾水定容至終體積2L,,繼續(xù)加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)通常還需要添加藥物,,以防止細(xì)菌污染。
選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學(xué),、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基,。其功能是使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌,,從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基:葡萄糖5%,,尿素0.1%,,硫化銨0.1%,,磷酸二氫鉀0.25%,磷酸氫二鈉0.05%,,七水合硫酸鎂0.1%,,七水合硫酸鐵0.01%,酵母膏0.05%,,孟加拉紅0.003%,pH4.5,。富集好氧自生固氮菌:甘露醇1%,,磷酸二氫鉀0.02%,七水合硫酸鎂0.02%,,氯化鈉0.02%,二水合硫酸鈣0.01%,,碳酸鈣0.5%液體培養(yǎng)基,、固體培養(yǎng)基和半固態(tài)培養(yǎng)基是常用的培養(yǎng)基種類。放線菌酮溶液
培養(yǎng)基制備的質(zhì)量和配方對于細(xì)胞和微生物的生長,、分化和培養(yǎng)效果具有至關(guān)重要的作用。pH7.8磷酸鹽緩沖液
1951年厄爾開發(fā)了供動物細(xì)胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基(MEM),。合成培養(yǎng)基的種類相當(dāng)多,。合成培養(yǎng)基成分已知,,便于對實(shí)驗(yàn)條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比,,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,,因此,,細(xì)胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,以克服合成培養(yǎng)基的不足,。普遍的作法是加入小牛血清,。動物血清成分復(fù)雜,各種生物大小分子混合在一起,,有些成分至今尚未搞清楚。血清對細(xì)胞生長很有效,,但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離,、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質(zhì)量的動物血清來源有限,,成本高,限制了它的大量使用,。無血清培養(yǎng)基不加動物血清,,在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細(xì)胞生長有效因子等,。pH7.8磷酸鹽緩沖液
上海瑞楚生物科技有限公司成立于2012-11-29,,同時(shí)啟動了以瑞楚生物為主的培養(yǎng)基,菌種,,標(biāo)準(zhǔn)品,,酶產(chǎn)業(yè)布局。瑞楚生物經(jīng)營業(yè)績遍布國內(nèi)諸多地區(qū)地區(qū),,業(yè)務(wù)布局涵蓋培養(yǎng)基,菌種,,標(biāo)準(zhǔn)品,,酶等板塊。同時(shí),,企業(yè)針對用戶,在培養(yǎng)基,,菌種,,標(biāo)準(zhǔn)品,,酶等幾大領(lǐng)域,提供更多,、更豐富的化工產(chǎn)品,,進(jìn)一步為全國更多單位和企業(yè)提供更具針對性的化工服務(wù)。上海瑞楚生物科技有限公司業(yè)務(wù)范圍涉及從事生物科技,、農(nóng)業(yè)科技、環(huán)??萍碱I(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù),,化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品,、煙花爆竹,、民用baozha物品、易制毒化學(xué)品),,日用百貨,,金屬制品,,塑料制品,儀器儀表,,實(shí)驗(yàn)室設(shè)備(除醫(yī)療器械)銷售,,會務(wù)服務(wù),,從事貨物及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)等。等多個(gè)環(huán)節(jié),,在國內(nèi)化工行業(yè)擁有綜合優(yōu)勢。在培養(yǎng)基,,菌種,,標(biāo)準(zhǔn)品,酶等領(lǐng)域完成了眾多可靠項(xiàng)目,。