總體而言,,所有微生物生長繁殖均需要培養(yǎng)基含有碳源、氮源,、無機(jī)鹽,、生長因子,、水及能源,但由于微生物營養(yǎng)類型復(fù)雜,,不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣的,,因此首先要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強(qiáng)的培養(yǎng)基,。自養(yǎng)型微生物能從簡單的無機(jī)物合成自身需要的糖類,、脂類,、蛋白質(zhì)、核酸,、維生素等復(fù)雜的有機(jī)物,,因此培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物的培養(yǎng)基完全可以(或應(yīng)該)由簡單的無機(jī)物組成。例如,,培養(yǎng)化能自養(yǎng)型的氧化硫硫桿菌(Thiobacillus thiooxdans)的培養(yǎng)基組成見表3.9,。在該培養(yǎng)基配制過程中并未專門加入其他碳源物質(zhì),而是依靠空氣中和溶于水中的CO2為氧化硫硫桿菌提供碳源,。LB培養(yǎng)基是普遍使用的通用培養(yǎng)基,適用于大多數(shù)腸道菌和非腸道菌的培養(yǎng),。SCDLP液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) ISO/GB
培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長良好,,營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低時(shí)不能滿足微生物正常生長所需,濃度過高時(shí)則可能對微生物生長起抑制作用,,例如高濃度糖類物質(zhì),、無機(jī)鹽,、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長,反而起到抑菌或殺菌作用,。另外,,培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累,其中碳氮比(C/N)的影響較大,。嚴(yán)格地講,,碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值,有時(shí)也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比,。例如,,在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過程中,,培養(yǎng)基碳氮比為4/1時(shí),菌體大量繁殖,,谷氨酸積累少,;當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時(shí),菌體繁殖受到抑制,,谷氨酸產(chǎn)量則大量增加,。 1%亞碲酸鉀溶液自制培養(yǎng)基需要小心配比,防止成分誤差或者污染,。
L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎,?L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是細(xì)胞生長的必須氨基酸,,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中狀態(tài)不穩(wěn)定,,它的降解速率隨保存時(shí)間,,保存溫度及保存環(huán)境pH值等變化而變化。L-丙胺酰-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine)是細(xì)胞培養(yǎng)中普遍使用的L-谷氨酰胺的替代品,,其在水溶液中穩(wěn)定性高,,即可保持長時(shí)間穩(wěn)定的營養(yǎng)供給,也降低了分解產(chǎn)物造成的細(xì)胞毒性,。L-丙胺酰-谷氨酰胺溶液(L-alanyl-L-glutamineslution)可作為哺乳動物貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑,。與谷氨酰胺相比,L-丙胺酰-谷氨酰胺不會自行降解成氨而導(dǎo)致細(xì)胞毒性,,作為添加物培養(yǎng)條件更加可控,可有效提高細(xì)胞活力,。
動物細(xì)胞培養(yǎng)必需的溶液,,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液。PH調(diào)整液:3.7%,、5.6%,、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細(xì)胞消化液:胰蛋白酶溶液,、EDTA溶液、膠原酶溶液,。1)青,、鏈霉素,,每毫升培養(yǎng)液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養(yǎng)液,。3)制霉菌素:濃度25U/ml,,小瓶分裝,每瓶一次用完,。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,,前者來源少,,價(jià)格高;后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛,,因?yàn)椴溉楹蟮男∨Q逯锌赡芎懈鼜?fù)雜的成分,。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸,、葡萄糖等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白,。培養(yǎng)基類型和配方可以根據(jù)需要進(jìn)行定制,,以滿足特定的實(shí)驗(yàn)需求。
不同類型微生物生長對氧化還原電位(F)的要求不一樣,,一般好氧性微生物在F值為+0.1V以上時(shí)可正常生長,,一般以+0.3—+0.4V為宜,厭氧性微生物只能在F值低于+0.1V條件下生長,,兼性厭氧微生物在F值為+0.1V以上時(shí)進(jìn)行好氧呼吸,在+0.1V以下時(shí)進(jìn)行發(fā)酵,。F值與氧分壓和pH有關(guān),,也受某些微生物代謝產(chǎn)物的影響。在pH相對穩(wěn)定的條件下,,可通過增加通氣量(如振蕩培養(yǎng),、攪拌)提高培養(yǎng)基的氧分壓,或加入氧化劑,,從而增加F值;在培養(yǎng)基中加入抗壞血酸,、硫化氫,、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫蘇糖醇等還原性物質(zhì)可降低F值,。培養(yǎng)基制備的質(zhì)量和配方對于細(xì)胞和微生物的生長,、分化和培養(yǎng)效果具有至關(guān)重要的作用。硫酸銅培養(yǎng)基
孟德爾-韋伯利法可以計(jì)算培養(yǎng)基的可利用能量,。SCDLP液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) ISO/GB
培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%還是10%CO2,,或者根本沒有影響?一般培養(yǎng)基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統(tǒng),,而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí),細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10% CO2,;當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5g時(shí),,則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞,。NaHCO3的作用:培養(yǎng)基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統(tǒng),并采用開放培養(yǎng),,使細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2及時(shí)溢出培養(yǎng)瓶,,再通過穩(wěn)定調(diào)節(jié)溫箱中CO2濃度(5%) ,與培養(yǎng)基中的NaHCO3處于平衡狀態(tài),,從而調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH值,。NEAA:非必須氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含幾種非必需氨基酸的合劑,,添加到的原培養(yǎng)基不同,,NEAA 也有不同的種類,,比如添加至MEM的NEAA,,含L-Alanine,、L-Asparagine,、L-Aspartic Acid,、 L-Glutamic Acid、L-Glycine,、L-Proline,、L-Serine。SCDLP液體培養(yǎng)基基礎(chǔ) ISO/GB
上海瑞楚生物科技有限公司在培養(yǎng)基,菌種,,標(biāo)準(zhǔn)品,,酶一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位,無論是產(chǎn)品還是服務(wù),,其高水平的能力始終貫穿于其中,。公司成立于2012-11-29,旗下瑞楚生物,,已經(jīng)具有一定的業(yè)內(nèi)水平。公司承擔(dān)并建設(shè)完成化工多項(xiàng)重點(diǎn)項(xiàng)目,,取得了明顯的社會和經(jīng)濟(jì)效益,。瑞楚生物將以精良的技術(shù)、優(yōu)異的產(chǎn)品性能和完善的售后服務(wù),,滿足國內(nèi)外廣大客戶的需求,。