對(duì)于檢測(cè)需要高靈敏度以及技術(shù)確認(rèn)的情況下,，數(shù)字PCR技術(shù)也可以發(fā)揮重要作用,。技術(shù)數(shù)據(jù)表明,，數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)的比較低檢測(cè)下限可到2copies/ml,，比qPCR靈敏度提升了100倍,。經(jīng)測(cè)試,，數(shù)字PCR在檢測(cè)和診斷的某些方面優(yōu)于金標(biāo)準(zhǔn)qPCR,，尤其是在低病毒載量樣本中,，相比起qPCR,，數(shù)字PCR特異性,、靈敏度、重現(xiàn)性和檢測(cè)限受影響更小,。因此,，未來(lái)預(yù)計(jì)數(shù)字PCR技術(shù)也將在類(lèi)疾病中得到更加廣的應(yīng)用。數(shù)字PCR的應(yīng)用甚廣,，除了可應(yīng)用于進(jìn)行突變的檢測(cè)以外,，也可運(yùn)用于基因擴(kuò)增的檢測(cè)。通過(guò)數(shù)字PCR技術(shù)可建立多重?zé)晒怏w系,，用于同時(shí)檢測(cè)比如非小細(xì)胞肺中常見(jiàn)的MET和HER2耐藥擴(kuò)增,。有研究報(bào)道，使用數(shù)字PCR技術(shù)對(duì)436例非小細(xì)胞肺樣品進(jìn)行檢測(cè),，并挑選樣本驗(yàn)證了數(shù)字PCR與RNA fish的檢測(cè)一致性,。結(jié)果表明，該數(shù)字PCR技術(shù)在保證了基因擴(kuò)增檢測(cè)準(zhǔn)確性的同時(shí),，還節(jié)約了檢測(cè)時(shí)間,。dPCR被稱(chēng)作第三代PCR技術(shù),，但dPCR技術(shù)的廣泛應(yīng)用逐漸顯現(xiàn)出一些不足之處。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

作為時(shí)下的熱點(diǎn)技術(shù),，數(shù)字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨(dú),、平行的微反應(yīng)單元（nL，納升級(jí)別）中,，使得每個(gè)反應(yīng)單元中盡可能含有1個(gè)模板分子,，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行擴(kuò)增、檢測(cè)和分布統(tǒng)計(jì),，從而實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)分子的比較 計(jì)數(shù),。（圖：數(shù)字PCR技術(shù)原理）根據(jù)微反應(yīng)單元的不同形式，數(shù)字PCR產(chǎn)品可分為微板式,、微滴式和芯片式等,。目前，市場(chǎng)上主要的數(shù)字PCR產(chǎn)品主要是基于微滴式和芯片式,，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統(tǒng)和ThermoFisher公司的QuantStudio系統(tǒng)等,。與一、二代PCR技術(shù)相比,，數(shù)字PCR具有很多優(yōu)勢(shì)：一是特異性,、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴(lài)內(nèi)參和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提下,，可直接得到比較 量化指標(biāo),；三是微反應(yīng)單元相互獨(dú)立、封閉,，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴(kuò)增產(chǎn)物間的相互干擾,，準(zhǔn)確度和可重復(fù)性較高。蘇州微滴式數(shù)字PCR熒光通道數(shù)字PCR是直接數(shù)出DNA分子的個(gè)數(shù),，是對(duì)起始樣品的定量,。

引物設(shè)計(jì)（DesignPrimers）：引物長(zhǎng)度（PrimerLength）：18-25個(gè)堿基之間。短的引物更易于同靶序列結(jié)合,，但過(guò)短的引物也更可能同基因組上的多個(gè)區(qū)域相結(jié)合而產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物,。更長(zhǎng)的引物會(huì)提高同靶序列結(jié)合的特異性，但過(guò)長(zhǎng)的引物（>30bp）同靶序列結(jié)合速度變慢,，降低結(jié)合率,。引物長(zhǎng)度和組成直接影響引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火溫度（AnnealingTemperatures）。引物的組成——GC%含量（GCContent）：指引物總堿基中G和C堿基數(shù)量的百分比,，該值應(yīng)在40-60%之間,。如果模板序列的GC含量較高，推薦使用較高Tm值的引物,。

Drop-off實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)針對(duì)相同擴(kuò)增子的TaqMan探針：與野生型序列互補(bǔ)而與突變位點(diǎn)不發(fā)生互補(bǔ)的Drop-off探針和與突變型和野生型基因都互補(bǔ)的Reference探針（如圖1A）,。在野生型等位基因的存在下,，Drop-off探針和Reference探針都將與目標(biāo)雜交，產(chǎn)生雙重陽(yáng)性信號(hào)（如圖1B,，藍(lán)色群）,。相反，如果存在突變的等位基因,，即使一個(gè)核苷酸的突變也會(huì)阻止Drop-off探針與之雜交,，因此只有Reference探針對(duì)目標(biāo)基因進(jìn)行退火，從而得到一個(gè)陽(yáng)性信號(hào),。相同模板進(jìn)行 96 次擴(kuò)增,，終點(diǎn)處產(chǎn)物量不恒定，但 Ct 值卻極具重現(xiàn)性,。

在使用dPCR進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測(cè)時(shí)，通常直接參照qPCR的方法,。使用不同技術(shù)對(duì)相同樣品檢測(cè)時(shí),，兩種方法的靈敏度是否具有可比性成為關(guān)注的問(wèn)題。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板,，每板765個(gè)微單元）芯片數(shù)字PCR分析儀測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)ERM-AD413檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米MON810,。該小組應(yīng)用dPCR技術(shù)評(píng)估在qPCR定義下的靈敏度數(shù)值，在拷貝數(shù)200-700之間,，dPCR與qPCR的測(cè)量結(jié)果具有一致性,。但與qPCR的靈敏度相比，dPCR在低于拷貝數(shù)200時(shí)有被低估的風(fēng)險(xiǎn),，在高于拷貝數(shù)1000時(shí)有被高估的風(fēng)險(xiǎn),。dPCR在同一陣列上同時(shí)測(cè)量轉(zhuǎn)基因和內(nèi)源性靶點(diǎn)時(shí)，需要稀釋內(nèi)源性靶點(diǎn)和轉(zhuǎn)基因靶點(diǎn)在合理拷貝數(shù)范圍內(nèi)以保證dPCR測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性,。臻準(zhǔn)推出新款數(shù)字PCR產(chǎn)品：AccuONE2.0數(shù)字PCR系統(tǒng),。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

數(shù)字PCR主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門(mén)研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

全自動(dòng)樣本制備系統(tǒng)DMX-1000配備氣流發(fā)生裝置和氣壓控制裝置,，能夠?qū)崿F(xiàn)高精度壓力控制,，結(jié)合**產(chǎn)品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技術(shù)，DMX-1000可以在70秒內(nèi)快速,、穩(wěn)定,、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴數(shù)量可達(dá)2萬(wàn)-60萬(wàn)個(gè),，粒徑范圍30-120μm,，性能穩(wěn)定。除此之外,，銳訊還提供微流控芯片的定制服務(wù),，以滿(mǎn)足不同的液滴數(shù)目和尺寸要求,。平板式快速擴(kuò)增儀TC-1000，不再使用傳統(tǒng)的96孔板,，而是特制的液滴擴(kuò)增芯片,；不再是傳統(tǒng)的“燒開(kāi)水”加熱模式，代之以平板式單液滴層均勻受熱的方式,。在這樣的改進(jìn)之下,，TC-1000完成40個(gè)PCR循環(huán)只需約45分鐘（TC-2.0升級(jí)版更是把時(shí)間縮短到了25分鐘！）,，大幅縮短了等待時(shí)間,，提升了實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。這對(duì)實(shí)驗(yàn)人員而言,，無(wú)疑是莫大的福利——高效完成工作,，不加班——愛(ài)工作，也愛(ài)生活,。上海一體化數(shù)字PCR分析應(yīng)用

廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司在數(shù)字PCR,，純水機(jī)，病理切片機(jī),，倍性分析儀一直在同行業(yè)中處于較強(qiáng)地位,，無(wú)論是產(chǎn)品還是服務(wù)，其高水平的能力始終貫穿于其中,。公司位于廣州市黃埔區(qū)銳豐三街4號(hào)617房,，成立于2015-04-17，迄今已經(jīng)成長(zhǎng)為精細(xì)化學(xué)品行業(yè)內(nèi)同類(lèi)型企業(yè)的佼佼者,。雙螺旋科學(xué)儀器以數(shù)字PCR,，純水機(jī)，病理切片機(jī),，倍性分析儀為主業(yè),，服務(wù)于精細(xì)化學(xué)品等領(lǐng)域，為全國(guó)客戶(hù)提供先進(jìn)數(shù)字PCR,，純水機(jī),，病理切片機(jī)，倍性分析儀,。多年來(lái),，已經(jīng)為我國(guó)精細(xì)化學(xué)品行業(yè)生產(chǎn)、經(jīng)濟(jì)等的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn),。