Quantagene q225 系列熒光定量PCR 系統(tǒng)主要特點(diǎn)：精確定量 以可靠的數(shù)據(jù)助力您的研究,。采用擬合算法計(jì)算 Ct 值,，定量誤差不超過±10%,。液體冷卻循環(huán)系統(tǒng)確?？组g溫度高度一致，溫差不超過 ±0.15°C,。光學(xué)系統(tǒng)無(wú)運(yùn)動(dòng)部件,，穩(wěn)定性增加，長(zhǎng)期使用無(wú)需校準(zhǔn)與維護(hù),。的儀器間重復(fù)性,，不同位置、不同反應(yīng)體積均不影響定量結(jié)果,?？焖俑咝?用更短的時(shí)間獲得更多數(shù)據(jù)。40 個(gè)循環(huán)的常規(guī) qPCR 只需43 分鐘,，較常見qPCR 儀多縮短60% 的時(shí)間,。在提高速度的同時(shí)保持了96 孔的高通量，滿足絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)需求,。小巧輕便 節(jié)省空間及您的寶貴樣品小體積為移動(dòng)實(shí)驗(yàn)和大量部署提供可能,。5-10 μl 的推薦反應(yīng)體積，較常規(guī)實(shí)驗(yàn)節(jié)省80%的試劑用量,，更節(jié)約您的珍貴樣品,。定量檢測(cè)是一種實(shí)時(shí)的PCR (qPCR) 檢測(cè)。測(cè)量（定量）每輪PCR擴(kuò)增循環(huán)中,，檢測(cè)目標(biāo)核酸片段的量,。準(zhǔn)確qPCR儀采購(gòu)

1996年，美國(guó)ABI公司（現(xiàn)已并入ThermoFisher公司）推出首臺(tái)熒光定量PCR檢測(cè)系統(tǒng),，通過熒光定量PCR儀器實(shí)時(shí)接收擴(kuò)增過程中熒光染料（或基團(tuán)）釋放的信號(hào),，對(duì)反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，進(jìn)而產(chǎn)生相應(yīng)的擴(kuò)增曲線,。在qPCR反應(yīng)中,，每個(gè)循環(huán)結(jié)束熒光染料（或基團(tuán)）都會(huì)釋放相應(yīng)的熒光信號(hào)，這些信號(hào)與qPCR產(chǎn)物量成正比,。qPCR擴(kuò)增的階段,，分為擴(kuò)增早期、指數(shù)期和平臺(tái)期,。在擴(kuò)增早期,，產(chǎn)物量很少,，機(jī)器接收的熒光信號(hào)微弱可能會(huì)被覆蓋；產(chǎn)物量逐漸增多反應(yīng)進(jìn)入qPCR指數(shù)擴(kuò)增期,，這個(gè)階段可以通過指數(shù)期的某個(gè)點(diǎn)來(lái)對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行定量和計(jì)算起始的模板量,；在擴(kuò)增平臺(tái)期，產(chǎn)物達(dá)到一定量,，同時(shí)熒光信號(hào)趨于穩(wěn)定,。在qPCR反應(yīng)中，可以通過不同循環(huán)閾值（Cycle threshold,，Ct）區(qū)分?jǐn)U增信號(hào)和背景信號(hào),，通過調(diào)節(jié)閾值實(shí)現(xiàn)定性和定量分析。靈敏度qPCR儀材質(zhì)實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,，實(shí)現(xiàn)每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,。

利用SYBR Green I可以檢測(cè)PCR反應(yīng)中獲得的全部雙鏈DNA,但是不能區(qū)分不同的雙鏈DNA。為了進(jìn)一步確保熒光檢測(cè)的就是靶DNA序列,，人們又設(shè)計(jì)了能與目的DNA序列特異結(jié)合的熒光探針,，如TaqMan探針。TaqMan探針是一小段被設(shè)計(jì)成可以與靶DNA序列中間部位結(jié)合的單鏈DNA（一般為50-150 bp）,并且該單鏈DNA的5'和3'端帶有短波長(zhǎng)和長(zhǎng)波長(zhǎng)兩個(gè)不同熒光基團(tuán),。這兩個(gè)熒光基團(tuán)由于距離過近,，在熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）作用下發(fā)生熒光淬滅，因而檢測(cè)不到熒光,。PCR反應(yīng)開始后,，隨著雙鏈DNA變性產(chǎn)生單鏈DNA，TaqMan探針結(jié)合到與之配對(duì)的靶DNA序列上,，并被具有外切酶活性的Taq DNA聚合酶逐個(gè)切除而降解,，從而解除熒光淬滅的束縛，熒光基團(tuán)在激發(fā)光下發(fā)岀熒光,，所產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度直接反映了被擴(kuò)增的靶DNA總量,。

qPCR擴(kuò)增效率100%的理想條件下的PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物量呈指數(shù)倍增長(zhǎng)Yn=Y0×2^n（X0：初始模板量,，n：PCR循環(huán)次數(shù),，Yn：第n次循環(huán)后的產(chǎn)物量）而實(shí)際PCR擴(kuò)增時(shí)可能存在模板質(zhì)量不佳引起的PCR擴(kuò)增抑制，DNA聚合酶的種類及活性影響,，非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的競(jìng)爭(zhēng)等情況,，擴(kuò)增效率無(wú)法達(dá)到100%。擴(kuò)增初期,，PCR產(chǎn)物指數(shù)倍增加,，隨著PCR產(chǎn)物的累積，各種影響因素的疊加，PCR產(chǎn)物不再指數(shù)倍增加,，每個(gè)循環(huán)后產(chǎn)物增加量恒定,，進(jìn)入線性增長(zhǎng)期，dNTP消耗殆盡,，酶逐漸失活,，擴(kuò)增“停滯”，產(chǎn)物量恒定,，進(jìn)入平臺(tái)期,。非理想條件下的PCR反應(yīng)：PCR產(chǎn)物量Yn=Y0(1+Ex)^n（Ex：擴(kuò)增效率）。dPCR可用于常規(guī)qPCR所需的標(biāo)準(zhǔn)品定量,，具有計(jì)量學(xué)意義 ,。

PCR反應(yīng)需要五種關(guān)鍵試劑：PCR模板：也稱為模板DNA，需要常規(guī)的試劑盒進(jìn)行提取,。如基因組DNA（gDNA），cDNA和質(zhì)粒DNA,。DNA聚合酶：所有PCR反應(yīng)都需要可在高溫下工作的DNA聚合酶,。Taq聚合酶是一種常用的酶，它可以在70°C時(shí)以60個(gè)堿基/秒的速率整合核苷酸,，并可以擴(kuò)增高達(dá)5kb的模板,，使其適用于無(wú)特殊要求的標(biāo)準(zhǔn)PCR。引物：DNA聚合酶需要短序列的核苷酸,，以指示它們需要在哪里開始擴(kuò)增,。在PCR中，這些序列稱為引物,，是單鏈DNA的短片段（約15-30個(gè)堿基）,。脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）：是合成DNA新鏈的基礎(chǔ)，包括四個(gè)基本DNA核苷酸（dATP,，dCTP,，dGTP和dTTP）。PCR緩沖液：PCR緩沖液可確保在整個(gè)PCR反應(yīng)過程中保持比較好條件,。PCR緩沖液的主要成分包括氯化鎂（MGCl2,，充當(dāng)DNA聚合酶的輔助因子），tris-HCl和氯化鉀（在反應(yīng)過程中保持穩(wěn)定的pH值）,。目前市面上已經(jīng)有很多成熟的包含PCR緩沖液的Taq聚合酶,。根據(jù)qPCR擴(kuò)增曲線整體趨勢(shì)，整個(gè)擴(kuò)增過程主要分為四個(gè)時(shí)期,，基線期,、指數(shù)增長(zhǎng)期、線性增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。準(zhǔn)確qPCR儀采購(gòu)

由于qPCR的高靈敏性,，陰性對(duì)照有出現(xiàn)擴(kuò)增信號(hào)的情況,，那么在針對(duì)這類問題時(shí)，我們需要判斷其原因所在,。準(zhǔn)確qPCR儀采購(gòu)

制備DNA——解交聯(lián)和DNA純化現(xiàn)在含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的染色質(zhì)片段已分離,，需要解交聯(lián)并純化DNA。解交聯(lián)通常采用高熱孵育和/或消化來(lái)完成,。注意：此時(shí)可以停止ChIP,。經(jīng)過解交聯(lián)和/或DNA純化后，可以將樣品于-20°C儲(chǔ)存,。定量DNA——測(cè)定目標(biāo)蛋白質(zhì)-DNA水平在該步驟中,，通過qPCR定量純化的DNA產(chǎn)物，通過qPCR,，您可以確定目標(biāo)蛋白是否存在于特定位點(diǎn),。ChIP的qPCR如何定量分析ChIP-qPCR 數(shù)據(jù)需要針對(duì)可變性來(lái)源進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，包括染色質(zhì)數(shù)量,、免疫沉淀的效率（富集效率）和 DNA 回收率,。兩種常用的標(biāo)準(zhǔn)化 ChIP-qPCR 數(shù)據(jù)方法——Percent Input法和富集倍數(shù)法（Fold Enrichmen）。與input相關(guān)的ChIP-qPCR數(shù)據(jù)包括ChIP的背景水平和input染色質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)化,。建議ChIP 實(shí)驗(yàn)重復(fù),，盡可能將結(jié)果與背景信號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)誤差一起顯示。準(zhǔn)確qPCR儀采購(gòu)

廣州雙螺旋科學(xué)儀器有限公司是我國(guó)數(shù)字PCR,，純水機(jī),，病理切片機(jī)，倍性分析儀專業(yè)化較早的有限責(zé)任公司（自然）之一,，公司成立于2015-04-17,，旗下臻準(zhǔn),美國(guó)艾科浦,銳訊生物,Sysmex,Eprerdia，已經(jīng)具有一定的業(yè)內(nèi)水平,。雙螺旋科學(xué)儀器以數(shù)字PCR,，純水機(jī)，病理切片機(jī),，倍性分析儀為主業(yè),，服務(wù)于精細(xì)化學(xué)品等領(lǐng)域，為全國(guó)客戶提供先進(jìn)數(shù)字PCR,，純水機(jī),，病理切片機(jī)，倍性分析儀,。雙螺旋科學(xué)儀器將以精良的技術(shù),、優(yōu)異的產(chǎn)品性能和完善的售后服務(wù),，滿足國(guó)內(nèi)外廣大客戶的需求。