離子層析法 當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí),,帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,,隨后用改變pH等辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來(lái)。 有機(jī)溶劑提取 蛋白質(zhì)純化有機(jī)溶劑提取的原理是:與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇,、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度明顯降低;而且在一定溫度,、pH值和離子強(qiáng)度下,引起蛋白質(zhì)沉淀的有機(jī)溶劑的濃度不同,因此,控制有機(jī)溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì),。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預(yù)冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰**白析出,從而純化冰**白。由于在室溫下,有機(jī)溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀,而且伴隨著變性,。濟(jì)南蛋白純化填料哪家好
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段,。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA,、RNA等分開,,由于此時(shí)樣本體積大、成分雜,,要求所用的樹脂高容量,、高流速、顆粒大,、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開,,必要時(shí)可加入相應(yīng)的保護(hù)劑(例如蛋白酶抑制劑),防止目的蛋白被降解。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率,,此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來(lái),,要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率,常用離子交換柱和疏水柱,,應(yīng)用時(shí)要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素,。選擇性指樹脂與目的蛋白結(jié)合的特異性,柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹脂上集中洗脫的能力,,洗脫峰越窄,,柱效越好。*有好的選擇性,,洗脫峰太寬,,蛋白照樣不能有效分離。濟(jì)南蛋白純化填料哪家好
分離純化某種蛋白質(zhì),,首先要把蛋白質(zhì)從原來(lái)的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來(lái)并保持原來(lái)的天然狀態(tài),,不丟失生物活性。為此,,動(dòng)物材料應(yīng)先剔除結(jié)締組織和脂肪組織,,種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質(zhì)的污染,油料種子比較好先用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑等脫脂,。然后根據(jù)不同的情況,,選擇適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⒔M織和細(xì)胞破碎,。動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿機(jī)破碎或用超聲波處理破碎,。植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁,,一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的,。細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較麻煩,因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子,,非常堅(jiān)韌,。破碎細(xì)菌細(xì)胞壁的常用方法有超聲波破碎,與砂研磨,、高壓擠壓或溶菌酶處理等,。組織和細(xì)胞破碎后,選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來(lái),。細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過(guò)濾的方法除去,。
一、根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離 1,、蛋白質(zhì)的鹽析法:中性鹽對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度有明顯影響,,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱鹽溶,;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),,蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析,。 2,、等電點(diǎn)沉淀法:蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力**小,,因而溶解度也**小,,各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀,,但此法很少單獨(dú)使用,,可與鹽析法結(jié)合用。
細(xì)分離 樣品經(jīng)粗分級(jí)分離以后,,一般體積較小,,雜蛋白大部分已被除去。進(jìn)一步純化,,一般使用層析法包括凝膠過(guò)濾,、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等,。必要時(shí)還可選擇電泳法,,包括區(qū)帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為***的純化步驟,。用于細(xì)分級(jí)分離的方法一般規(guī)模較小,,但分辨率很高。 結(jié)晶是蛋白質(zhì)分離純化的***步驟,。盡管結(jié)晶過(guò)程并不能保證蛋白一定是均一的,,但是只有某種蛋白在溶液中數(shù)量上占有優(yōu)勢(shì)時(shí)才能形成結(jié)晶。結(jié)晶過(guò)程本身也伴隨著一定程度的純化,,而重結(jié)晶又可除去少量夾雜的蛋白,。由于結(jié)晶過(guò)程中從未發(fā)現(xiàn)過(guò)變性蛋白,因此蛋白的結(jié)晶不僅是純度的一個(gè)標(biāo)志,,也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標(biāo),。南京銷售蛋白純化填料
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精細(xì)化學(xué)品是指能增進(jìn)或賦予一種(類)產(chǎn)品以特定功能或本身?yè)碛刑囟üδ艿男∨恐圃旌蛻?yīng)用的、技術(shù)密度高,、附加值高,,純度高的化學(xué)品,是基礎(chǔ)化學(xué)品進(jìn)一步深加工的產(chǎn)物,。納米材料,、鍍膜材料,、生物試劑、塑料制品(以上不含危險(xiǎn)化學(xué)品,、藥品,、獸藥)的研發(fā)、銷售;高分子科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓;從事上述產(chǎn)品及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)(祖國(guó)限定企業(yè)經(jīng)營(yíng)或禁止進(jìn)出口的商品和技術(shù)除外),。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營(yíng)活動(dòng))產(chǎn)品品種多,、更新速度快、**性強(qiáng),,生產(chǎn)工藝復(fù)雜,,這決定了進(jìn)入本行業(yè)的主要障礙是技術(shù)研發(fā)壁壘、環(huán)保與安全壁壘,、銷售渠道壁壘和資本加入壁壘,。精細(xì)化工產(chǎn)品生產(chǎn)的主要原料是基礎(chǔ)化工產(chǎn)品。我國(guó)化工有限責(zé)任公司經(jīng)過(guò)多年發(fā)展,,已建立了較為完整的化工產(chǎn)業(yè)體系,,化工產(chǎn)品品種齊全,一些重要原材料具備了較大的生產(chǎn)能力和產(chǎn)量基數(shù),,并有十余種主要化工產(chǎn)品產(chǎn)量居世界前列,。精細(xì)化學(xué)品主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè)、建筑業(yè),、紡織業(yè),、醫(yī)藥業(yè)、電子設(shè)備等行業(yè),。隨著下游各行業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展,,對(duì)微球,聚苯乙烯微球,,納米微球,,熒光微球的需求數(shù)量上升,性能要求進(jìn)一步提高,,精細(xì)化工行業(yè)與下**業(yè)之間的關(guān)系變得更加緊密,。濟(jì)南蛋白純化填料哪家好
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