分離純化某種蛋白質(zhì),，首先要把蛋白質(zhì)從原來的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來并保持原來的天然狀態(tài)，不丟失生物活性,。為此,，動(dòng)物材料應(yīng)先剔除結(jié)締組織和脂肪組織，種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質(zhì)的污染,，油料種子比較好先用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑等脫脂,。然后根據(jù)不同的情況,，選擇適當(dāng)?shù)姆椒?，將組織和細(xì)胞破碎。動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿機(jī)破碎或用超聲波處理破碎,。植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁,，一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的,。細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較麻煩，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子,，非常堅(jiān)韌,。破碎細(xì)菌細(xì)胞壁的常用方法有超聲波破碎，與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等,。組織和細(xì)胞破碎后,，選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來。細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去,。蛋白純化填料哪家專業(yè)

一,、根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離 1、蛋白質(zhì)的鹽析法：中性鹽對蛋白質(zhì)的溶解度有明顯影響,，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,，蛋白質(zhì)的溶解度增加，此稱鹽溶,；當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),，蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出，這種現(xiàn)象稱鹽析,。 2,、等電點(diǎn)沉淀法：蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力**小，因而溶解度也**小,，各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,，可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀，但此法很少單獨(dú)使用,，可與鹽析法結(jié)合用,。深圳直銷蛋白純化填料

如果所要的蛋白主要集中在某一細(xì)胞組分，如細(xì)胞核,、染色體,、核糖體或可溶性細(xì)胞質(zhì)等，則可利用差速離心的方法將它們分開,，收集該細(xì)胞組分作為下步純化的材料,。如果碰上所要蛋白是與細(xì)胞膜或膜質(zhì)細(xì)胞器結(jié)合的，則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚,，然后用適當(dāng)介質(zhì)提取。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液（有時(shí)還雜有核酸,、多糖之類）獲得后,，選用一套適當(dāng)?shù)姆椒ǎ瑢⑺牡鞍着c其他雜蛋白分離開來,。一般這一步的分離用鹽析,、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法。這些方法的特點(diǎn)是簡便,、處理量大,，既能除去大量雜質(zhì),，又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大,，又不適于用沉淀或鹽析法濃縮,，則可采用超過濾,、凝膠過濾,、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。

細(xì)分離 樣品經(jīng)粗分級(jí)分離以后,，一般體積較小,，雜蛋白大部分已被除去。進(jìn)一步純化,，一般使用層析法包括凝膠過濾,、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等,。必要時(shí)還可選擇電泳法,，包括區(qū)帶電泳、等電點(diǎn)聚焦等作為***的純化步驟,。用于細(xì)分級(jí)分離的方法一般規(guī)模較小,，但分辨率很高。 結(jié)晶是蛋白質(zhì)分離純化的***步驟,。盡管結(jié)晶過程并不能保證蛋白一定是均一的,，但是只有某種蛋白在溶液中數(shù)量上占有優(yōu)勢時(shí)才能形成結(jié)晶。結(jié)晶過程本身也伴隨著一定程度的純化,，而重結(jié)晶又可除去少量夾雜的蛋白,。由于結(jié)晶過程中從未發(fā)現(xiàn)過變性蛋白，因此蛋白的結(jié)晶不僅是純度的一個(gè)標(biāo)志,，也是斷定制品處于天然狀態(tài)的有力指標(biāo),。

蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法,。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA,、RNA等分開，由于此時(shí)樣本體積大,、成分雜,，要求所用的樹脂高容量、高流速,、顆粒大,、粒徑分布寬．并可以迅速將蛋白與污染物分開，必要時(shí)可加入相應(yīng)的保護(hù)劑（例如蛋白酶抑制劑）,，防止目的蛋白被降解,。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率，此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來，要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率,，常用離子交換柱和疏水柱,，應(yīng)用時(shí)要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素。選擇性指樹脂與目的蛋白結(jié)合的特異性,，柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹脂上集中洗脫的能力,，洗脫峰越窄，柱效越好,。*有好的選擇性,，洗脫峰太寬，蛋白照樣不能有效分離,。天津蛋白純化填料哪家好

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通常要將有機(jī)溶劑冷卻,然后在不斷攪拌下加入有機(jī)溶劑防止局部濃度過高,蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決,。對于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多、不溶于水的蛋白質(zhì),可以用乙醇,、**和丁醇等有機(jī)溶劑提取,它們有一定的親水性和較強(qiáng)的親脂性,是理想的提取液,。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白**早由Cohn于1949年提出,用于制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法,不僅分辨率高,、提純效果好,、可同時(shí)分離多種成分,而且有抑菌、***的作用,。蛋白純化填料哪家專業(yè)

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