離子層析法 當被分離的蛋白質溶液流經離子交換層析柱時,,帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質被吸附在離子交換劑上,隨后用改變pH等辦法將吸附的蛋白質洗脫下來,。 有機溶劑提取 蛋白質純化有機溶劑提取的原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇,、乙醇)能使一些蛋白質在水中的溶解度明顯降低;而且在一定溫度、pH值和離子強度下,引起蛋白質沉淀的有機溶劑的濃度不同,因此,控制有機溶劑的濃度可以分離純化蛋白質,。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰**白析出,從而純化冰**白,。由于在室溫下,有機溶劑不僅能引起蛋白質的沉淀,而且伴隨著變性。杭州直銷蛋白純化填料
一,、根據(jù)蛋白質溶解度不同的分離 1,、蛋白質的鹽析法:中性鹽對蛋白質的溶解度有明顯影響,,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,蛋白質的溶解度增加,,此稱鹽溶,;當鹽濃度繼續(xù)升高時,蛋白質的溶解度不同程度下降并先后析出,,這種現(xiàn)象稱鹽析,。 2,、等電點沉淀法:蛋白質在靜電狀態(tài)時顆粒之間的靜電斥力**小,,因而溶解度也**小,各種蛋白質的等電點有差別,,可利用調節(jié)溶液的pH達到某一蛋白質的等電點使之沉淀,,但此法很少單獨使用,可與鹽析法結合用,??诒玫鞍准兓盍夏募液?/p>
蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段二個階段。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法,。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如DNA,、RNA等分開,由于此時樣本體積大,、成分雜,,要求所用的樹脂高容量、高流速,、顆粒大,、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開,必要時可加入相應的保護劑(例如蛋白酶抑制劑),,防止目的蛋白被降解,。精細純化階段則需要更高的分辨率,此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質接近的蛋白區(qū)分開來,,要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率,,常用離子交換柱和疏水柱,應用時要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個因素,。選擇性指樹脂與目的蛋白結合的特異性,,柱效則是指各蛋白成分逐個從樹脂上集中洗脫的能力,洗脫峰越窄,,柱效越好,。*有好的選擇性,洗脫峰太寬,,蛋白照樣不能有效分離,。
通常要將有機溶劑冷卻,然后在不斷攪拌下加入有機溶劑防止局部濃度過高,蛋白質變性問題就可以很大程度上得到解決,。對于一些和脂質結合比較牢固或分子中極性側鏈較多、不溶于水的蛋白質,可以用乙醇,、**和丁醇等有機溶劑提取,它們有一定的親水性和較強的親脂性,是理想的提取液,。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白**早由Cohn于1949年提出,用于制備丙種球蛋白。冷乙醇法也是WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法,不僅分辨率高,、提純效果好,、可同時分離多種成分,而且有抑菌、***的作用,。
如果所要的蛋白主要集中在某一細胞組分,,如細胞核、染色體,、核糖體或可溶性細胞質等,,則可利用差速離心的方法將它們分開,收集該細胞組分作為下步純化的材料,。如果碰上所要蛋白是與細胞膜或膜質細胞器結合的,,則必須利用超聲波或去污劑使膜結構解聚,然后用適當介質提取,。 當?shù)鞍踪|提取液(有時還雜有核酸,、多糖之類)獲得后,選用一套適當?shù)姆椒?,將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來,。一般這一步的分離用鹽析、等電點沉淀和有機溶劑分級分離等方法,。這些方法的特點是簡便,、處理量大,既能除去大量雜質,,又能濃縮蛋白溶液,。有些蛋白提取液體積較大,又不適于用沉淀或鹽析法濃縮,,則可采用超過濾,、凝膠過濾、冷凍真空干燥或其他方法進行濃縮,。 廈門蛋白純化填料
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精細化學品行業(yè)的傳統(tǒng)領域主要包括微球,,聚苯乙烯微球,納米微球,,熒光微球等領域,。經過長期積累,我國精細化工行業(yè)在傳統(tǒng)領域已經基本滿足了國民經濟發(fā)展的需要,部分產品已具有一定的國際競爭力,,染料,、農藥的產量已處于全球**,涂料產量已達到全球第四位,。精細化工中間體產品**性強,,需要建立特定銷售渠道,能否與客戶保持長期業(yè)務合作,,將對生產型企業(yè)日常經營和長遠發(fā)展構成重大影響,。精細化工中間體的質量和純度直接影響到終端產品的性能和品質。此外,,由于發(fā)達地區(qū)人力成本高,,超過**保護期的農藥原藥和醫(yī)藥原料藥已無生產優(yōu)勢,以中國與印度為象征的發(fā)展中國地區(qū)逐漸成為農藥,、醫(yī)藥中間體和加工的主要生產基地,。與基礎化工行業(yè)相比,,精細化工行業(yè)主要生產精細化學品,,是在基礎化學品的基礎上深加工的產物,行業(yè)內產品覆蓋了社會生活的各個方面,,從涂料,、電子、油墨,、醫(yī)藥,、造紙、食品添加劑等,,到航空航天,、汽車、機械,、建筑新材料,、新能源技術等高新技術方面均得到非常普遍的應用,在國民經濟的發(fā)展中起到了不可替代的作用,。由于精細化工產業(yè)在國民經濟,、地區(qū)產業(yè)中的重要作用,其發(fā)展程度也被視為地區(qū)戰(zhàn)略發(fā)展的重要部分,。杭州直銷蛋白純化填料
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