分離純化多肽的常用方法 分離方法 采取何種分離純化方法要由所提取的組織材料,、所要提取物質的性質決定,。對蛋白質,、多肽提取分離常用的方法包括:鹽析法,、超濾法,、凝膠過濾法、等電點沉淀法,、離子交換層析,、親和層析、吸附層析,、逆流分溶,、酶解法等。這些方法常常組合到一起對特定的物質進行分離純化,,同時上述這些方法也是蛋白,、多肽類物質分析中常用的手段,如層析,、叫泳等,。 核磁共振,基質輔助激光解析/ 離子化-飛行時間質譜, 電霧離子化質譜,連續(xù)流快原子轟擊質譜,質譜分析除上述方法之外,氨基酸組成分析,、氨基酸序列分析,、場解析質譜、IR,、UV 光譜,、CD、圓而色譜,、生物鑒定法,、放射性同位素標記法及免疫學方法等都已應用于多肽類物質的結果鑒定、分析檢測之中,。深圳多肽分離填料哪家好
分離純化多肽的常用方法-分子排阻色譜 SEC 是利用多肽分子大小,、形狀差異來分離純化多肽物質,特別對一些較大的聚集態(tài)的分子更為方便,,如人重組生長(hgH)的分離,,不同結構、構型的GH 在SEC 柱上分離行為完全不同,,從而可分離不同構型或在氨基酸序列上有微小差異的變異體,,利用SEC 研究修飾化的PEG 的分離方法,此PEC 具有半衰期長,、作用強的特點,。一些分子量較大的肽或蛋白均可利用此法分離分析。 分離純化多肽的常用方法--離子交換色譜 IEXC 可在中性條件下,,利用多肽的帶電性不同分離純化具有生物活性的多肽,。其可分為陽離子柱與陰離子柱兩大類,,還有一些新型樹脂,如大孔型樹脂,、均孔型樹脂,、離子交換纖維素、葡聚糖凝膠,、瓊脂糖凝膠樹脂等,。在多肽類物質的分離分析研究中,對多肽的性質,、洗脫劑,、洗脫條件的研究較多,不同的多肽分離條件有所不同,,特別是洗脫劑的離子強度,、鹽濃度等對純化影響較大。Wu 等報道利用離子交換柱層析法,,探討分離牛碳酸酐異構體和牛血清白蛋白,、雞血清白蛋白酶的提取條件,獲得了有價值的數(shù)據(jù)供今后此類物質分離研究,。合肥多肽分離填料制造廠家
分離純化多肽的常用方法-高效液相色譜(HPLC) HPLC 的出現(xiàn)為肽類物質的分離提供了有利的方法手段,因為蛋白質,、多肽的HPLC 應用與其它化合物相比,,在適宜的色譜條件下不僅可以在短時間內完成分離目的,更重要的是HPLC 能在制備規(guī)模上生產具有生物活性的多肽,。因此在尋找多肽類物質分離制備的比較好條件上,,不少學者做了大量的工作。如何保持多肽活性,、如何選擇固定相材料,、洗脫液種類、如何分析測定都是目前研究的內容,。海博納新材料科技(蘇州)有限公司歡迎來電
分離純化多肽的常用方法-反相高效液相色譜 結果與保留值之間的關系:利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結構的多肽在柱上的保留情況,。為了獲得一系列的保留系數(shù),Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質與結構進行分析,,得出了不同氨基酸組成對保留系數(shù)影響的關系,,其中極性氨基酸殘基在2~20 氨基酸組成的肽中,可減少在柱上的保留時間,;在10~60 氨基酸組成的肽中,,非極性氨基酸較多也可減少在柱上的保留時間,而含5~25 個氨基酸的小肽中,,非極性氨基酸增加可延長在柱上的保留時間,。 同時有不少文獻報道了肽鏈長度,、氨基酸組成、溫度等條件對保留情況的影響,,并利用計算機處理分析得到每種多肽的分離提取的比較好條件,。 肽圖分析(Peptide Mapping):肽圖分析是根據(jù)蛋白質、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點,,使用專一性較強的蛋白水解酶[ 一般未肽鏈內切酶(endopeptidase)]作用于特殊的肽鏈位點將多肽裂解成小片斷,,通過一定的分離檢測手段形成特征性指紋圖譜,肽圖分析對多肽結構研究合特性鑒別具有重要意義,。
多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,,是蛋白質水解的中間產物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽,、四肽、五肽等,。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,。 肽(peptide)是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,它也是蛋白質水解的中間產物,。 一般肽中含有的氨基酸的數(shù)目為二到九,根據(jù)肽中氨基酸的數(shù)量的不同,肽有多種不同的稱呼:由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽、四肽,、五肽等,,一直到九肽。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,,道爾頓),能透過半透膜,,不被三氯乙酸所沉淀,。也有文獻把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽,;由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質,,換言之,蛋白質有時也被稱為多肽,。多肽也簡稱為肽,,是20世紀被發(fā)現(xiàn)的。北京多肽分離填料制造廠家
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分離純化多肽的常用方法-膜蛋白色譜 CMP+分離強蔬水性蛋白,、多肽混合物的層析系統(tǒng),,一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,并由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(P-端),,又具有陽離子鈣(C-端),,與固定相結合主要決定于膜蛋白的大小、SDS 結合量有關,。利用原子散射法研究cAMP的分離機制發(fā)現(xiàn),,樣品與SDS 結合后在離子交換柱上存在SDS 分子、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,,從而達到分級分離的目的,。深圳多肽分離填料哪家好
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