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來源: 發(fā)布時間:2020-03-20

分離純化多肽的常用方法-置換色譜 HPDC 是利用小分子置換劑來交換色譜柱上的樣品,,從而達到分離的目的。它具有分離組分含量較少成分的特性,。利用HPDC 鑒定分離了低于總量1% 組分的活性人重組生長(rHG ),。在研究非毒**換劑時Jayarama 發(fā)現(xiàn)化葡萄糖(Detran Sulfate,DS)是對β 乳球蛋白A 和B 的良好置換劑,一般DS 的相對分子質(zhì)量為1×104 和4×104 **宜,。研究表明置換劑的相對分子質(zhì)量越低,,越易于與固定相結(jié)合,因此在分離相對分子質(zhì)量小的多肽時,,需要更小的置換劑才能將其置換純化出來,。天津口碑好多肽分離填料

分離純化多肽的常用方法-疏水作用色譜 HIC 是利用多肽中含有疏水基因,可與固定相之間產(chǎn)生疏水作用而達到分離分析的目的,,其比RP-GPLC 具有較少使多肽變性的特點,。利用GIC 分離生產(chǎn)(GH)產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性比EP-GPLC 分離的要穩(wěn)定,活性較穩(wěn)定,。Geng 等利用HIC 柱的低變性特點,,將大腸桿菌表達出的經(jīng)鹽酸胍乙啶變性得到人重組干擾素-γ。通過HIC 柱純化,、折疊出高生物活性的產(chǎn)品,。不同人尿表皮生長因子(EGF)也利用HIC 純化到了,均具有良好的生物活性,。HIC 可將未經(jīng)離子交換柱的樣品純化,。而RP-HPLC 則不能達到這一要求。鄭州多肽分離填料制造廠家

分離純化多肽的常用方法-膜蛋白色譜 CMP+分離強蔬水性蛋白,、多肽混合物的層析系統(tǒng),,一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,并由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化,。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(P-端),,又具有陽離子鈣(C-端),與固定相結(jié)合主要決定于膜蛋白的大小,、SDS 結(jié)合量有關(guān),。利用原子散射法研究cAMP的分離機制發(fā)現(xiàn),,樣品與SDS 結(jié)合后在離子交換柱上存在SDS 分子,、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,從而達到分級分離的目的,。

分離純化多肽的常用方法-反相高效液相色譜 結(jié)果與保留值之間的關(guān)系:利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結(jié)構(gòu)的多肽在柱上的保留情況,。為了獲得一系列的保留系數(shù),Wilce 等利用多線性回歸方法對2106 種肽的保留性質(zhì)與結(jié)構(gòu)進行分析,,得出了不同氨基酸組成對保留系數(shù)影響的關(guān)系,,其中極性氨基酸殘基在2~20 氨基酸組成的肽中,可減少在柱上的保留時間,;在10~60 氨基酸組成的肽中,,非極性氨基酸較多也可減少在柱上的保留時間,而含5~25 個氨基酸的小肽中,,非極性氨基酸增加可延長在柱上的保留時間,。 同時有不少文獻報道了肽鏈長度,、氨基酸組成、溫度等條件對保留情況的影響,,并利用計算機處理分析得到每種多肽的分離提取的比較好條件,。 肽圖分析(Peptide Mapping):肽圖分析是根據(jù)蛋白質(zhì)、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點,,使用專一性較強的蛋白水解酶[ 一般未肽鏈內(nèi)切酶(endopeptidase)]作用于特殊的肽鏈位點將多肽裂解成小片斷,,通過一定的分離檢測手段形成特征性指紋圖譜,肽圖分析對多肽結(jié)構(gòu)研究合特性鑒別具有重要意義,。

多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,,是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽,、四肽、五肽等,。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,。 肽(peptide)是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物,。 一般肽中含有的氨基酸的數(shù)目為二到九,根據(jù)肽中氨基酸的數(shù)量的不同,肽有多種不同的稱呼:由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽、四肽,、五肽等,,一直到九肽。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,,道爾頓),能透過半透膜,,不被三氯乙酸所沉淀,。也有文獻把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽,;由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),,換言之,蛋白質(zhì)有時也被稱為多肽,。多肽也簡稱為肽,,是20世紀被發(fā)現(xiàn)的。成都多肽分離填料制造廠家

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分離純化多肽的常用方法 分離方法 采取何種分離純化方法要由所提取的組織材料,、所要提取物質(zhì)的性質(zhì)決定,。對蛋白質(zhì)、多肽提取分離常用的方法包括:鹽析法、超濾法,、凝膠過濾法,、等電點沉淀法、離子交換層析,、親和層析,、吸附層析、逆流分溶,、酶解法等,。這些方法常常組合到一起對特定的物質(zhì)進行分離純化,同時上述這些方法也是蛋白,、多肽類物質(zhì)分析中常用的手段,,如層析、叫泳等,。 核磁共振,基質(zhì)輔助激光解析/ 離子化-飛行時間質(zhì)譜, 電霧離子化質(zhì)譜,連續(xù)流快原子轟擊質(zhì)譜,質(zhì)譜分析除上述方法之外,,氨基酸組成分析、氨基酸序列分析,、場解析質(zhì)譜,、IR、UV 光譜,、CD,、圓而色譜、生物鑒定法,、放射性同位素標記法及免疫學方法等都已應用于多肽類物質(zhì)的結(jié)果鑒定,、分析檢測之中。天津口碑好多肽分離填料

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