分離純化多肽的常用方法-分子排阻色譜 SEC 是利用多肽分子大小,、形狀差異來(lái)分離純化多肽物質(zhì),特別對(duì)一些較大的聚集態(tài)的分子更為方便,,如人重組生長(zhǎng)(hgH)的分離,,不同結(jié)構(gòu)、構(gòu)型的GH 在SEC 柱上分離行為完全不同,,從而可分離不同構(gòu)型或在氨基酸序列上有微小差異的變異體,,利用SEC 研究修飾化的PEG 的分離方法,此PEC 具有半衰期長(zhǎng),、作用強(qiáng)的特點(diǎn),。一些分子量較大的肽或蛋白均可利用此法分離分析。 分離純化多肽的常用方法--離子交換色譜 IEXC 可在中性條件下,,利用多肽的帶電性不同分離純化具有生物活性的多肽,。其可分為陽(yáng)離子柱與陰離子柱兩大類,還有一些新型樹脂,,如大孔型樹脂,、均孔型樹脂、離子交換纖維素,、葡聚糖凝膠,、瓊脂糖凝膠樹脂等。在多肽類物質(zhì)的分離分析研究中,,對(duì)多肽的性質(zhì),、洗脫劑、洗脫條件的研究較多,,不同的多肽分離條件有所不同,,特別是洗脫劑的離子強(qiáng)度、鹽濃度等對(duì)純化影響較大,。Wu 等報(bào)道利用離子交換柱層析法,,探討分離牛碳酸酐異構(gòu)體和牛血清白蛋白、雞血清白蛋白酶的提取條件,,獲得了有價(jià)值的數(shù)據(jù)供今后此類物質(zhì)分離研究,。上海直銷多肽分離填料
分離純化多肽的常用方法 分離方法 采取何種分離純化方法要由所提取的組織材料、所要提取物質(zhì)的性質(zhì)決定,。對(duì)蛋白質(zhì),、多肽提取分離常用的方法包括:鹽析法、超濾法,、凝膠過(guò)濾法,、等電點(diǎn)沉淀法、離子交換層析,、親和層析,、吸附層析、逆流分溶,、酶解法等,。這些方法常常組合到一起對(duì)特定的物質(zhì)進(jìn)行分離純化,同時(shí)上述這些方法也是蛋白,、多肽類物質(zhì)分析中常用的手段,,如層析、叫泳等,。 核磁共振,基質(zhì)輔助激光解析/ 離子化-飛行時(shí)間質(zhì)譜, 電霧離子化質(zhì)譜,連續(xù)流快原子轟擊質(zhì)譜,質(zhì)譜分析除上述方法之外,,氨基酸組成分析、氨基酸序列分析,、場(chǎng)解析質(zhì)譜,、IR、UV 光譜,、CD,、圓而色譜、生物鑒定法,、放射性同位素標(biāo)記法及免疫學(xué)方法等都已應(yīng)用于多肽類物質(zhì)的結(jié)果鑒定,、分析檢測(cè)之中。廣州直銷多肽分離填料
分離純化多肽的常用方法-高效液相色譜(HPLC) HPLC 的出現(xiàn)為肽類物質(zhì)的分離提供了有利的方法手段,,因?yàn)榈鞍踪|(zhì),、多肽的HPLC 應(yīng)用與其它化合物相比,在適宜的色譜條件下不僅可以在短時(shí)間內(nèi)完成分離目的,,更重要的是HPLC 能在制備規(guī)模上生產(chǎn)具有生物活性的多肽,。因此在尋找多肽類物質(zhì)分離制備的比較好條件上,,不少學(xué)者做了大量的工作。如何保持多肽活性,、如何選擇固定相材料,、洗脫液種類、如何分析測(cè)定都是目前研究的內(nèi)容,。海博納新材料科技(蘇州)有限公司歡迎來(lái)電
分離純化多肽的常用方法-膜蛋白色譜 CMP+分離強(qiáng)蔬水性蛋白,、多肽混合物的層析系統(tǒng),一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,,并由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化,。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(tuán)(P-端),又具有陽(yáng)離子鈣(C-端),,與固定相結(jié)合主要決定于膜蛋白的大小,、SDS 結(jié)合量有關(guān)。利用原子散射法研究cAMP的分離機(jī)制發(fā)現(xiàn),,樣品與SDS 結(jié)合后在離子交換柱上存在SDS 分子,、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,從而達(dá)到分級(jí)分離的目的,。
分離純化多肽的常用方法-疏水作用色譜 HIC 是利用多肽中含有疏水基因,,可與固定相之間產(chǎn)生疏水作用而達(dá)到分離分析的目的,其比RP-GPLC 具有較少使多肽變性的特點(diǎn),。利用GIC 分離生產(chǎn)(GH)產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性比EP-GPLC 分離的要穩(wěn)定,,活性較穩(wěn)定。Geng 等利用HIC 柱的低變性特點(diǎn),,將大腸桿菌表達(dá)出的經(jīng)鹽酸胍乙啶變性得到人重組干擾素-γ,。通過(guò)HIC 柱純化、折疊出高生物活性的產(chǎn)品,。不同人尿表皮生長(zhǎng)因子(EGF)也利用HIC 純化到了,,均具有良好的生物活性。HIC 可將未經(jīng)離子交換柱的樣品純化,。而RP-HPLC 則不能達(dá)到這一要求,。鄭州多肽分離填料制造廠家
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分離純化多肽的常用方法-反相高效液相色譜 結(jié)果與保留值之間的關(guān)系:利用RP-HPLC 分離多肽首先得確定不同結(jié)構(gòu)的多肽在柱上的保留情況。為了獲得一系列的保留系數(shù),,Wilce 等利用多線性回歸方法對(duì)2106 種肽的保留性質(zhì)與結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,,得出了不同氨基酸組成對(duì)保留系數(shù)影響的關(guān)系,其中極性氨基酸殘基在2~20 氨基酸組成的肽中,,可減少在柱上的保留時(shí)間,;在10~60 氨基酸組成的肽中,非極性氨基酸較多也可減少在柱上的保留時(shí)間,而含5~25 個(gè)氨基酸的小肽中,,非極性氨基酸增加可延長(zhǎng)在柱上的保留時(shí)間,。 同時(shí)有不少文獻(xiàn)報(bào)道了肽鏈長(zhǎng)度、氨基酸組成,、溫度等條件對(duì)保留情況的影響,,并利用計(jì)算機(jī)處理分析得到每種多肽的分離提取的比較好條件,。 肽圖分析(Peptide Mapping):肽圖分析是根據(jù)蛋白質(zhì),、多肽的分子量大小以及氨基酸組成特點(diǎn),使用專一性較強(qiáng)的蛋白水解酶[ 一般未肽鏈內(nèi)切酶(endopeptidase)]作用于特殊的肽鏈位點(diǎn)將多肽裂解成小片斷,,通過(guò)一定的分離檢測(cè)手段形成特征性指紋圖譜,,肽圖分析對(duì)多肽結(jié)構(gòu)研究合特性鑒別具有重要意義。 上海直銷多肽分離填料
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