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來源: 發(fā)布時(shí)間:2020-03-27

蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣,是一項(xiàng)重要的操作技術(shù),。 一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì),一些含量十分豐富,,一些*含有幾個(gè)拷貝,。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì),必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來,。 蛋白純化要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來,。每種蛋白間的大小,、形狀、電荷,、疏水性,、溶解度和生物學(xué)活性都會(huì)有差異,利用這些差異可將蛋白從混合物如大腸桿菌裂解物中提取出來得到重組蛋白,。北京口碑好蛋白純化填料

如果所要的蛋白主要集中在某一細(xì)胞組分,,如細(xì)胞核、染色體,、核糖體或可溶性細(xì)胞質(zhì)等,,則可利用差速離心的方法將它們分開,收集該細(xì)胞組分作為下步純化的材料,。如果碰上所要蛋白是與細(xì)胞膜或膜質(zhì)細(xì)胞器結(jié)合的,,則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚,然后用適當(dāng)介質(zhì)提取,。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液(有時(shí)還雜有核酸,、多糖之類)獲得后,選用一套適當(dāng)?shù)姆椒?,將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來,。一般這一步的分離用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法,。這些方法的特點(diǎn)是簡便,、處理量大,,既能除去大量雜質(zhì),又能濃縮蛋白溶液,。有些蛋白提取液體積較大,,又不適于用沉淀或鹽析法濃縮,則可采用超過濾,、凝膠過濾,、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮。 青島口碑好蛋白純化填料

離子層析法 當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí),,帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,,隨后用改變pH等辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來。 有機(jī)溶劑提取 蛋白質(zhì)純化有機(jī)溶劑提取的原理是:與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇,、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度明顯降低;而且在一定溫度,、pH值和離子強(qiáng)度下,引起蛋白質(zhì)沉淀的有機(jī)溶劑的濃度不同,因此,控制有機(jī)溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì)。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預(yù)冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰**白析出,從而純化冰**白,。由于在室溫下,有機(jī)溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀,而且伴隨著變性,。

分離純化某種蛋白質(zhì),首先要把蛋白質(zhì)從原來的組織或細(xì)胞中以溶解的狀態(tài)釋放出來并保持原來的天然狀態(tài),,不丟失生物活性,。為此,動(dòng)物材料應(yīng)先剔除結(jié)締組織和脂肪組織,,種子材料應(yīng)先去殼甚至去種皮以免受單寧等物質(zhì)的污染,,油料種子比較好先用低沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑等脫脂。然后根據(jù)不同的情況,,選擇適當(dāng)?shù)姆椒?,將組織和細(xì)胞破碎。動(dòng)物組織和細(xì)胞可用電動(dòng)搗碎機(jī)或勻漿機(jī)破碎或用超聲波處理破碎,。植物組織和細(xì)胞由于具有纖維素,、半纖維素和果膠等物質(zhì)組成的細(xì)胞壁,一般需要用石英砂或玻璃粉和適當(dāng)?shù)奶崛∫阂黄鹧心サ姆椒ɑ蛴美w維素酶處理也能達(dá)到目的,。細(xì)菌細(xì)胞的破碎比較麻煩,,因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)菌細(xì)胞壁的骨架實(shí)際上是一個(gè)借共價(jià)鍵連接而成的肽聚糖囊狀大分子,非常堅(jiān)韌,。破碎細(xì)菌細(xì)胞壁的常用方法有超聲波破碎,,與砂研磨、高壓擠壓或溶菌酶處理等,。組織和細(xì)胞破碎后,,選擇適當(dāng)?shù)木彌_液把所要的蛋白提取出來。細(xì)胞碎片等不溶物用離心或過濾的方法除去,。

一,、根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離 1,、蛋白質(zhì)的鹽析法:中性鹽對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度有明顯影響,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,,蛋白質(zhì)的溶解度增加,,此稱鹽溶;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),,蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,,這種現(xiàn)象稱鹽析。 2,、等電點(diǎn)沉淀法:蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力**小,,因而溶解度也**小,各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,,可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀,,但此法很少單獨(dú)使用,可與鹽析法結(jié)合用,。成都專業(yè)蛋白純化填料

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精細(xì)化學(xué)品工業(yè)是生產(chǎn)精細(xì)化學(xué)品工業(yè)的通稱,簡稱“精細(xì)化工”,,具有附加價(jià)值高,、收入高等經(jīng)濟(jì)特性。精細(xì)化工行業(yè)技術(shù)密集程度高,、產(chǎn)品附加值高,、收入率水平較高,且發(fā)展依賴科技創(chuàng)新,,是當(dāng)今世界化學(xué)工業(yè)發(fā)展的戰(zhàn)略重點(diǎn),,也是一個(gè)地區(qū)綜合技術(shù)水平的重要標(biāo)志以及發(fā)展**快的經(jīng)濟(jì)領(lǐng)域之一。隨著國內(nèi)經(jīng)濟(jì)飛速發(fā)展,、生產(chǎn)技術(shù)的進(jìn)步,、國內(nèi)市場需求的飛速增長、原料和資本供應(yīng)狀況的改善,、全球化專業(yè)分工以及發(fā)達(dá)地區(qū)由于生產(chǎn)成本和市場飽和等原因而采取戰(zhàn)略轉(zhuǎn)移和重組等策略,,我國納米材料、鍍膜材料,、生物試劑,、塑料制品(以上不含危險(xiǎn)化學(xué)品、藥品,、獸藥)的研發(fā),、銷售;高分子科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù),、技術(shù)轉(zhuǎn)讓;從事上述產(chǎn)品及技術(shù)的進(jìn)出口業(yè)務(wù)(祖國限定企業(yè)經(jīng)營或禁止進(jìn)出口的商品和技術(shù)除外),。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營活動(dòng))行業(yè)遇到了前所未有的發(fā)展機(jī)遇。精細(xì)化學(xué)品品種多,,同一種中間體產(chǎn)品經(jīng)不同的工藝流程可延伸出幾種甚至幾十種不同用途的衍生品,,生產(chǎn)工藝復(fù)雜多變,技術(shù)復(fù)雜,。精細(xì)化工各種產(chǎn)品均需要經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室開發(fā),、小試、中試再到規(guī)?;a(chǎn),,還需要根據(jù)下游客戶的需求變化及時(shí)更新或改進(jìn),對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性要求較高,,需要企業(yè)在生產(chǎn)的過程中不斷改進(jìn)工藝,,積累經(jīng)驗(yàn)。因此,,有限責(zé)任公司企業(yè)對(duì)細(xì)分領(lǐng)域精細(xì)化工產(chǎn)品衍生開發(fā),、對(duì)生產(chǎn)工藝的經(jīng)驗(yàn)積累及創(chuàng)新能力是一個(gè)精細(xì)化工企業(yè)的重點(diǎn)競爭力。精細(xì)化學(xué)品主要應(yīng)用于農(nóng)業(yè),、建筑業(yè),、紡織業(yè)、醫(yī)藥業(yè),、電子設(shè)備等行業(yè),。隨著下游各行業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展,對(duì)微球,,聚苯乙烯微球,,納米微球,熒光微球的需求數(shù)量上升,,性能要求進(jìn)一步提高,,精細(xì)化工行業(yè)與下**業(yè)之間的關(guān)系變得更加緊密。北京口碑好蛋白純化填料

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