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來源: 發(fā)布時(shí)間:2020-06-02

通常要將有機(jī)溶劑冷卻,然后在不斷攪拌下加入有機(jī)溶劑防止局部濃度過高,蛋白質(zhì)變性問題就可以很大程度上得到解決。對(duì)于一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中極性側(cè)鏈較多,、不溶于水的蛋白質(zhì),可以用乙醇,、**和丁醇等有機(jī)溶劑提取,它們有一定的親水性和較強(qiáng)的親脂性,是理想的提取液。冷乙醇分離法提取免疫球蛋白**早由Cohn于1949年提出,用于制備丙種球蛋白,。冷乙醇法也是WHO規(guī)程和中國生物制品規(guī)程推薦的方法,不僅分辨率高,、提純效果好、可同時(shí)分離多種成分,而且有抑菌,、***的作用,。廣東直銷蛋白純化填料

離子層析法 當(dāng)被分離的蛋白質(zhì)溶液流經(jīng)離子交換層析柱時(shí),帶有與離子交換劑相反電荷的蛋白質(zhì)被吸附在離子交換劑上,,隨后用改變pH等辦法將吸附的蛋白質(zhì)洗脫下來,。 有機(jī)溶劑提取 蛋白質(zhì)純化有機(jī)溶劑提取的原理是:與水互溶的有機(jī)溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度明顯降低;而且在一定溫度,、pH值和離子強(qiáng)度下,引起蛋白質(zhì)沉淀的有機(jī)溶劑的濃度不同,因此,控制有機(jī)溶劑的濃度可以分離純化蛋白質(zhì),。例如,在冰浴中磁力攪拌下,在4℃預(yù)冷的培養(yǎng)液中緩慢加入乙醇(-25℃),可以使冰**白析出,從而純化冰**白。由于在室溫下,有機(jī)溶劑不僅能引起蛋白質(zhì)的沉淀,而且伴隨著變性,。廈門蛋白純化填料

一,、根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離 1、蛋白質(zhì)的鹽析法:中性鹽對(duì)蛋白質(zhì)的溶解度有明顯影響,,一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱鹽溶,;當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時(shí),,蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現(xiàn)象稱鹽析,。 2、等電點(diǎn)沉淀法:蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力**小,因而溶解度也**小,,各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,,可利用調(diào)節(jié)溶液的pH達(dá)到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀,但此法很少單獨(dú)使用,,可與鹽析法結(jié)合用,。

蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細(xì)純化階段二個(gè)階段。一般蛋白純化采用的方法為樹脂法,。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細(xì)胞成分如DNA,、RNA等分開,由于此時(shí)樣本體積大,、成分雜,,要求所用的樹脂高容量、高流速,、顆粒大,、粒徑分布寬.并可以迅速將蛋白與污染物分開,必要時(shí)可加入相應(yīng)的保護(hù)劑(例如蛋白酶抑制劑),,防止目的蛋白被降解,。精細(xì)純化階段則需要更高的分辨率,此階段是要把目的蛋白與那些分子量大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,,要用更小的樹脂顆粒以提高分辨率,,常用離子交換柱和疏水柱,應(yīng)用時(shí)要綜合考慮樹脂的選擇性和柱效兩個(gè)因素,。選擇性指樹脂與目的蛋白結(jié)合的特異性,,柱效則是指各蛋白成分逐個(gè)從樹脂上集中洗脫的能力,洗脫峰越窄,,柱效越好,。*有好的選擇性,洗脫峰太寬,,蛋白照樣不能有效分離,。

如果所要的蛋白主要集中在某一細(xì)胞組分,如細(xì)胞核,、染色體,、核糖體或可溶性細(xì)胞質(zhì)等,則可利用差速離心的方法將它們分開,,收集該細(xì)胞組分作為下步純化的材料,。如果碰上所要蛋白是與細(xì)胞膜或膜質(zhì)細(xì)胞器結(jié)合的,則必須利用超聲波或去污劑使膜結(jié)構(gòu)解聚,,然后用適當(dāng)介質(zhì)提取,。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)提取液(有時(shí)還雜有核酸,、多糖之類)獲得后,選用一套適當(dāng)?shù)姆椒?,將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來,。一般這一步的分離用鹽析、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑分級(jí)分離等方法,。這些方法的特點(diǎn)是簡便,、處理量大,既能除去大量雜質(zhì),,又能濃縮蛋白溶液,。有些蛋白提取液體積較大,又不適于用沉淀或鹽析法濃縮,,則可采用超過濾,、凝膠過濾、冷凍真空干燥或其他方法進(jìn)行濃縮,。 天津蛋白純化填料

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