分離純化多肽的常用方法-置換色譜 HPDC 是利用小分子置換劑來交換色譜柱上的樣品,,從而達(dá)到分離的目的,。它具有分離組分含量較少成分的特性。利用HPDC 鑒定分離了低于總量1% 組分的活性人重組生長(rHG ),。在研究非毒**換劑時Jayarama 發(fā)現(xiàn)化葡萄糖(Detran Sulfate,,DS)是對β 乳球蛋白A 和B 的良好置換劑,,一般DS 的相對分子質(zhì)量為1×104 和4×104 **宜。研究表明置換劑的相對分子質(zhì)量越低,,越易于與固定相結(jié)合,,因此在分離相對分子質(zhì)量小的多肽時,需要更小的置換劑才能將其置換純化出來,。成都直銷多肽分離填料
多肽是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,,是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物。由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽,、四肽、五肽等,。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,。 肽(peptide)是α-氨基酸以肽鍵連接在一起而形成的化合物,它也是蛋白質(zhì)水解的中間產(chǎn)物,。 一般肽中含有的氨基酸的數(shù)目為二到九,根據(jù)肽中氨基酸的數(shù)量的不同,肽有多種不同的稱呼:由兩個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫做二肽,,同理類推還有三肽、四肽,、五肽等,,一直到九肽。通常由10~100個氨基酸分子脫水縮合而成的化合物叫多肽,,它們的分子量低于10,000Da(Dalton,,道爾頓),能透過半透膜,,不被三氯乙酸所沉淀,。也有文獻(xiàn)把由2~10個氨基酸組成的肽稱為寡肽(小分子肽);10~50個氨基酸組成的肽稱為多肽,;由50個以上的氨基酸組成的肽就稱為蛋白質(zhì),,換言之,蛋白質(zhì)有時也被稱為多肽,。多肽也簡稱為肽,,是20世紀(jì)被發(fā)現(xiàn)的。成都直銷多肽分離填料
分離純化多肽的常用方法-疏水作用色譜 HIC 是利用多肽中含有疏水基因,,可與固定相之間產(chǎn)生疏水作用而達(dá)到分離分析的目的,,其比RP-GPLC 具有較少使多肽變性的特點。利用GIC 分離生產(chǎn)(GH)產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性比EP-GPLC 分離的要穩(wěn)定,,活性較穩(wěn)定,。Geng 等利用HIC 柱的低變性特點,將大腸桿菌表達(dá)出的經(jīng)鹽酸胍乙啶變性得到人重組干擾素-γ。通過HIC 柱純化,、折疊出高生物活性的產(chǎn)品,。不同人尿表皮生長因子(EGF)也利用HIC 純化到了,均具有良好的生物活性,。HIC 可將未經(jīng)離子交換柱的樣品純化,。而RP-HPLC 則不能達(dá)到這一要求。
分離純化多肽的常用方法 分離方法 采取何種分離純化方法要由所提取的組織材料,、所要提取物質(zhì)的性質(zhì)決定,。對蛋白質(zhì)、多肽提取分離常用的方法包括:鹽析法,、超濾法,、凝膠過濾法、等電點沉淀法,、離子交換層析,、親和層析、吸附層析,、逆流分溶,、酶解法等。這些方法常常組合到一起對特定的物質(zhì)進(jìn)行分離純化,,同時上述這些方法也是蛋白,、多肽類物質(zhì)分析中常用的手段,如層析,、叫泳等,。 核磁共振,基質(zhì)輔助激光解析/ 離子化-飛行時間質(zhì)譜, 電霧離子化質(zhì)譜,連續(xù)流快原子轟擊質(zhì)譜,質(zhì)譜分析除上述方法之外,氨基酸組成分析,、氨基酸序列分析,、場解析質(zhì)譜、IR,、UV 光譜,、CD,、圓而色譜,、生物鑒定法、放射性同位素標(biāo)記法及免疫學(xué)方法等都已應(yīng)用于多肽類物質(zhì)的結(jié)果鑒定,、分析檢測之中,。
分離純化多肽的常用方法-分子排阻色譜 SEC 是利用多肽分子大小、形狀差異來分離純化多肽物質(zhì),,特別對一些較大的聚集態(tài)的分子更為方便,,如人重組生長(hgH)的分離,不同結(jié)構(gòu)、構(gòu)型的GH 在SEC 柱上分離行為完全不同,,從而可分離不同構(gòu)型或在氨基酸序列上有微小差異的變異體,,利用SEC 研究修飾化的PEG 的分離方法,此PEC 具有半衰期長,、作用強(qiáng)的特點,。一些分子量較大的肽或蛋白均可利用此法分離分析。 分離純化多肽的常用方法--離子交換色譜 IEXC 可在中性條件下,,利用多肽的帶電性不同分離純化具有生物活性的多肽,。其可分為陽離子柱與陰離子柱兩大類,還有一些新型樹脂,,如大孔型樹脂,、均孔型樹脂、離子交換纖維素,、葡聚糖凝膠,、瓊脂糖凝膠樹脂等。在多肽類物質(zhì)的分離分析研究中,,對多肽的性質(zhì),、洗脫劑、洗脫條件的研究較多,,不同的多肽分離條件有所不同,,特別是洗脫劑的離子強(qiáng)度、鹽濃度等對純化影響較大,。Wu 等報道利用離子交換柱層析法,,探討分離牛碳酸酐異構(gòu)體和牛血清白蛋白、雞血清白蛋白酶的提取條件,,獲得了有價值的數(shù)據(jù)供今后此類物質(zhì)分離研究,。質(zhì)量多肽分離填料哪家專業(yè)
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分離純化多肽的常用方法-膜蛋白色譜 CMP+分離強(qiáng)蔬水性蛋白、多肽混合物的層析系統(tǒng),,一般有去垢劑(如SDS)溶解膜蛋白后形成SDS-融膜蛋白,,并由羥基磷灰石為固定相的柱子分離純化。羥基磷灰石柱具有陰離子磷酸基團(tuán)(P-端),,又具有陽離子鈣(C-端),,與固定相結(jié)合主要決定于膜蛋白的大小、SDS 結(jié)合量有關(guān),。利用原子散射法研究cAMP的分離機(jī)制發(fā)現(xiàn),,樣品與SDS 結(jié)合后在離子交換柱上存在SDS 分子、帶電荷氨基酸與固定相中帶電離子間的交換,,從而達(dá)到分級分離的目的,。成都直銷多肽分離填料
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