整體化色譜柱填料技術(shù) 　　整體化色譜柱(monolithic column)也是近年液相色譜柱填料研究的另一個(gè)重要方向。整體柱，又稱(chēng)為棒狀柱,，是一種用有機(jī)或無(wú)機(jī)聚合方法在色譜柱內(nèi)進(jìn)行原位聚合的連續(xù)床固定相,。與常規(guī)裝填的液相色譜柱相比，整體柱具有更好的多孔性和滲透性,，可以使用高流速實(shí)現(xiàn)快速的傳質(zhì)分離。聚合物整體柱一般采用離子交換或親和色譜方式，用于生物大分子如蛋白,、抗體、DNA 的超快速分析，這樣的色譜柱包括Bio-Monolith 離子交換柱和Protein A,、Protein G 親和色譜柱,，以及ThermoroSwift IEX 離子交換柱和ProSwift RP 柱。使用此類(lèi)整體化色譜柱分析大分子物質(zhì)時(shí),，分離通?？梢栽趲追昼妰?nèi)完成。無(wú)機(jī)基質(zhì)的整體柱一般采用硅膠以及在硅膠表面鍵合的反相填料,，柱床中既有供流動(dòng)相流過(guò)的粗孔(約2 μm),，又有便于溶質(zhì)進(jìn)行傳質(zhì)的中孔(幾十個(gè)納米)，如圖5(來(lái)源于Merck 的目錄資料)所示,。市場(chǎng)上商品化的整體柱產(chǎn)品不多,，如Chromolith? 整體柱，該柱子具有非常低的柱壓和較高的基質(zhì)耐受能力,，因此在普通高效液相色譜儀以及超高效液相色譜儀上都可以兼容,。青島口碑好液相色譜填料

液相色譜填料技術(shù)進(jìn)展 正在得到更的應(yīng)用，例如,，使用1.8 μm 的C18 色譜柱分析《中國(guó)藥典》2015 年版一部中的復(fù)方丹參滴丸指紋圖譜,，其時(shí)間可以控制在10 min 以內(nèi)中國(guó)藥典對(duì)亞2 微米色譜柱技術(shù)革新和應(yīng)用給予高度的關(guān)注，適時(shí)地修訂了液相色譜法的相關(guān)內(nèi)容,。中國(guó)藥典2015 年版四部通則0512 色譜法規(guī)定,，若需使用小粒徑(約2μm)填充劑，輸液泵的性能,、進(jìn)樣體積,、檢測(cè)池體積和系統(tǒng)的死體積等必須與之匹配;如有必要，色譜條件也應(yīng)作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整,。當(dāng)對(duì)其測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生爭(zhēng)議時(shí),，應(yīng)以品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件的測(cè)定結(jié)果為準(zhǔn)。西安直銷(xiāo)液相色譜填料

不同選擇性的色譜固定相 一般硅膠基質(zhì)填料的固定相其pH適用范圍為2~8,。為提高硅膠基質(zhì)的填料鍵合相在酸性條件下的穩(wěn)定性,，一般在碳鏈的硅烷基側(cè)鏈上采用大體積的有機(jī)基團(tuán)進(jìn)行保護(hù)，比如采用雙異丁基或雙異丙基的側(cè)鏈保護(hù),，使得此類(lèi)色譜填料能夠穩(wěn)定地用于pH0.8~8 的流動(dòng)相體系中,，而不會(huì)導(dǎo)致硅烷鍵的流失。如中國(guó)藥典方法中,，洛伐他汀,、氫溴酸右美沙芬等在較低pH 條件下，使用這類(lèi)的色譜柱可以獲得較好的耐用性,。 　　在提高硅膠基質(zhì)填料堿性穩(wěn)定性方面,，除了使用致密鍵合,、雙配位鍵合以及雙重封端等技術(shù)，還使用硅膠- 有機(jī)雜化顆粒,，或者在硅膠表面進(jìn)行聚合物包覆,，提高硅膠在堿性條下的穩(wěn)定性，同時(shí)降低硅　　醇基在堿性條件下的解離,，避免堿性化合物拖尾,。近期推出能夠耐受高pH 穩(wěn)定性的Poroshell HPH-C18(2.7 μm)和C8 填料(4 μm)，這種填料兼顧了表面多孔型填料和硅膠表面有機(jī)雜化的優(yōu)勢(shì),，具有高柱效,、寬pH 耐受范圍(2~11)的優(yōu)勢(shì)。

不同選擇性的色譜固定相 　　由于反相色譜分離基于多種作用力的結(jié)果,，不同鍵合相或同一種鍵合相但不同的硅膠基質(zhì),、封端技術(shù)和鍵合技術(shù)，其疏水作用,、空間位阻,、氫鍵作用、靜電作用,、π-π作用,、偶極-偶極作用等能力不同，對(duì)化合物的分離能力不同,，故而表現(xiàn)出不一樣的選擇性,。比如，在碳鏈中嵌入極性的酰胺基團(tuán),，不僅能夠使鍵合相的水相兼容性增加,，而且可以提高化合物與固定相之間的氫鍵作用能力，使之獲得與普通C18 填料不一樣的選擇性,。這樣的色譜柱有ZORBAX Bonus RP 和Waters Symmetry shield 等。Huawei Gu等利用Bonus RP 色譜柱與其他常規(guī)碳鏈反相色譜柱選擇性的不同,，使用二維液相色譜實(shí)現(xiàn)復(fù)雜體系的分離,。又如，苯基柱可以提供π-π 作用,，用于含有苯環(huán)或能提供π 鍵作用的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物分析;而五氟苯基(Penta Fluorophenyl Propyl,，PFP)柱(則除了提供π-π 作用外，還可以提供偶極作用,、靜電作用等,，提高了苯環(huán)上位置異構(gòu)體的分辨能力。

多種分離模式的應(yīng)用 　LCCC 法是根據(jù)聚合物的功能基團(tuán),、嵌段結(jié)構(gòu)的差異進(jìn)行聚合物分離的一種色譜技術(shù),。LCCC 法的原理是基于臨界點(diǎn)之上,、臨界點(diǎn)之下以及臨界點(diǎn)附近的標(biāo)度理論。當(dāng)使用多孔填充材料作為固定相時(shí),，分子排阻色譜(size exclusion chromatography,，SEC)和相互作用色譜(interaction chromatography，IC)的分離機(jī)制在分離聚合物時(shí)同時(shí)發(fā)生作用,。在某個(gè)特殊色譜條件(固定相,、流動(dòng)相組成、溫度)下,，存在2 種分離機(jī)制的臨界點(diǎn),，被稱(chēng)為焓熵互補(bǔ)點(diǎn)或色譜臨界條件(critical conditions)或臨界吸附點(diǎn)(critical adsorption　point，CAP),。在這一點(diǎn),，聚合物分子按照分子末端功能基團(tuán)的不同或嵌段結(jié)構(gòu)的差異分離，與分子的聚合物摩爾質(zhì)量(分子量)無(wú)關(guān),，聚合物的洗脫體積等于色譜柱的空隙體積,。目前，這一技術(shù)成功用于脂溶性聚合物的分析,，對(duì)于水溶性聚合物的應(yīng)用研究有待深入和擴(kuò)展,。為適應(yīng)大分子量聚合物的分離需要，比常規(guī)孔徑,、粒徑大得多的填料和更寬柱徑的色譜柱也應(yīng)隨之出現(xiàn),。天津液相色譜填料哪家好

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多種分離模式的應(yīng)用 　　目前液相色譜中主要應(yīng)用的依然是反相色譜，不過(guò)隨著色譜技術(shù)的發(fā)展和分析要求的提高,，其他一些分離模式正逐步得到更加的應(yīng)用,，如親水作用色譜(HILIC)、超臨界流體色譜(supercritical　fluid chromatography,，SFC),、臨界點(diǎn)色譜(liquid chromatography at critical condition，LCCC)和多維色譜技術(shù)等,。 　　HILIC 是近年來(lái)逐漸被認(rèn)可的一種強(qiáng)極性化合物分離方法,，它是基于極性化合物在色譜固定相表面水層和流動(dòng)相之間進(jìn)行的親水分配作用達(dá)到保留的一種分離模式。在HILIC分離中,，流動(dòng)相中水的比例越小,，則洗脫能力越弱;反之，洗脫能力越強(qiáng),?；衔锏臉O性越小，則保留越弱;反之,，則保留越強(qiáng),。HILIC 模式可以跟任何檢測(cè)器兼容,，并能提高質(zhì)譜的靈敏度，避免使用離子對(duì)試劑,，避免進(jìn)行衍生化,，是極性化合物分析**有潛力的分離模式。HILIC 模式一般采用高純硅膠,、硅膠表面鍵合二醇基,、酰胺、兩性離子基團(tuán)等基團(tuán)或極性聚合物等為固定相,，而采用高比例的有機(jī)相為流動(dòng)相,。青島口碑好液相色譜填料

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