培養(yǎng)基是生物制品領(lǐng)域中常用的物質(zhì),,在細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)中十分必要,,但是現(xiàn)有技術(shù)中有些培養(yǎng)基的某種組份容易分解,,造成保存時間短等問題,,導(dǎo)致培養(yǎng)基的使用成本十分高,。其中,,在動物培養(yǎng)基中,,谷氨酰胺是一種必要的組份,,但是在常溫下,,很短的時間內(nèi),,約7-10日中培養(yǎng)基中的谷氨酰胺成份就可降解90%以上,這給其商品化帶來很大的困難,。這樣的培養(yǎng)基在現(xiàn)有技術(shù)中很多,,都具有上述的缺陷,例如,,中國CN1087778C公開了一種雜交瘤細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基,,其中包含有谷氨酰胺成份,但是這種培養(yǎng)基的保存時間十分有限,,很難達(dá)到商業(yè)使用的目的,。培養(yǎng)基制備器鋁制表面光滑平坦;易于清潔,,無孔隙和裂縫,以防培養(yǎng)基流進(jìn)去.中國臺灣自動培養(yǎng)基制備器
天然培養(yǎng)基中血清主要作用:提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸,、維生素,、無機(jī)物、脂類物質(zhì),、核酸衍生物等,,是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。提供和各種生長因子:胰島素,、腎上腺皮質(zhì)(氫化可的松,、)、類固醇(雌二醇,、睪酮,、孕酮)等。生長因子如成纖維細(xì)胞生長因子,、表皮生長因子,、血小板生長因子等。提供結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白作用是攜帶重要地低分子量物質(zhì),,如白蛋白攜帶維生素,、脂肪、以及等,,轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵,。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起重要作用。提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷,。陜西培養(yǎng)基制備器品牌攪拌轉(zhuǎn)速異常需檢查電機(jī)碳刷磨損情況,。
培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或混濁出現(xiàn)醫(yī)學(xué),需過濾成清晰透明后方可使用,,常用的過濾方法如下:1.液體培養(yǎng)基:液體培養(yǎng)基必須清晰,,以便觀察細(xì)菌的生長情況,常用濾紙過濾,,亦可在加熱前加入用水稀釋的雞蛋白(1000ml培養(yǎng)基用1個雞蛋白)在100℃加熱后保持60~70℃,,40~60分鐘,使其不溶性物質(zhì)附于凝固的蛋白上而沉淀,,然后再用虹吸法吸出上清液或以濾紙過濾,。2.固體培養(yǎng)基:如系瓊脂培養(yǎng)基,于加熱融化后需趁熱以絨布或兩層紗布中夾脫脂棉過濾,;亦可用自然沉淀法,,即將瓊脂培養(yǎng)基盛人鋁鍋或廣口搪瓷容器內(nèi),以高壓(103.43kPa)蒸汽融化15分鐘后,,靜置高壓鍋內(nèi)過夜,,次日將瓊脂傾出,,用刀將底部沉渣切去,再融化即可收清晰的瓊脂培養(yǎng)基,。
制備培養(yǎng)基有什么要求:1,、培養(yǎng)基需保持澄清,便于觀察細(xì)菌的生長情況,,培養(yǎng)基加熱煮沸后,,可用脫脂棉花或絨布過濾,以除去沉淀物,,必要時可用雞蛋白澄清處理,,所用瓊脂條要預(yù)先洗凈晾干后使用,避免因瓊脂含雜質(zhì)而影響透明度,。2,、盛裝培養(yǎng)基不宜用鐵、銅等容器,,使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器為好,。3、培養(yǎng)基的滅菌既要達(dá)到完全滅菌目的,,又要注意不因加熱而降低其營養(yǎng)價值,,121℃15min即可,如為含有不耐高熱物質(zhì)的培養(yǎng)基如糖類,、血清、明膠等,,則應(yīng)采用低溫滅菌或間歇法滅菌,,一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃,、TTC,、克菌素等,待基礎(chǔ)瓊脂高壓滅菌后涼至50℃左右再加入,。**蒸汽加熱**(高壓滅菌鍋):需關(guān)注蒸汽生成速度及均勻性,。
培養(yǎng)基的安全分裝:無菌補(bǔ)料:通過分裝口可以定量添加無菌添加劑。大尺寸的分裝口帶有安全鎖,。通過使用一個瓶子將添加劑添加到分裝開口或通過一個septum膜,,使用注射器將添加劑加入,確保了添加劑的無菌添加,。無菌分裝:培養(yǎng)基制備器的分裝口可以在分裝的時候打開,,用于無菌分裝培養(yǎng)基。硅膠管是使用分裝接頭連接到分裝口,。為了確保培養(yǎng)基的無菌分裝,,硅膠管和分裝接頭必須提前在滅菌器中滅菌,。培養(yǎng)基可以通過集成的空壓機(jī)產(chǎn)生的無菌空氣壓力分裝或通過連接到常見的蠕動泵或其他集成成泵的裝置,來進(jìn)行培養(yǎng)基的分裝,。分裝選項(xiàng):制備和滅菌過的培養(yǎng)基可以通過一個軟管進(jìn)行分裝,。在每次滅菌進(jìn)程中,內(nèi)吸管和分裝口也通過進(jìn)入的蒸汽進(jìn)行了滅菌,。分裝軟管和連接到該軟管的分裝接頭必須使用合適的蒸汽滅菌工藝預(yù)先滅菌,,并且必須在無菌條件下連接到分裝口。**小規(guī)模實(shí)驗(yàn)室**:選擇帶高效加熱/冷卻功能的臺式培養(yǎng)基制備儀,。中國臺灣實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備器
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