報(bào)告基因選用GFP或RFP,，**小啟動(dòng)子來(lái)自斑馬魚(yú)gata2基因,；將上述載體與體外轉(zhuǎn)錄得到的Tol2轉(zhuǎn)座酶的mRNA共同注射到斑馬魚(yú)的單細(xì)胞受精卵中,，受精卵長(zhǎng)大后成為founder,；Founder外交（out-cross）得到F1代胚胎,，從中挑選出對(duì)于報(bào)告基因具有組織特異性表達(dá)模式的胚胎，拍照記錄后分類(lèi)培養(yǎng),；F1長(zhǎng)大后通過(guò)linker-mediatedPCR的方法鑒定對(duì)應(yīng)于GFP（或RFP）表達(dá)圖式的Tol2插入位點(diǎn),，并通過(guò)與已知基因組數(shù)據(jù)比較,，對(duì)插入位點(diǎn)進(jìn)行定位與分析,；通過(guò)外交純化得到轉(zhuǎn)基因魚(yú),，直至得到只含有單個(gè)插入品系的轉(zhuǎn)基因魚(yú)。斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)提高藥物研發(fā)效率,。湖南斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型

斑馬魚(yú)基因敲除品系制備服務(wù)簡(jiǎn)介1.基因敲除(GeneKnockout)根據(jù)給定GeneID或Genename，分析基因保守結(jié)構(gòu)域,，在保守結(jié)構(gòu)域或客戶(hù)指定區(qū)域設(shè)計(jì)靶點(diǎn)并制備靶點(diǎn)gRNA，gRNA和Cas9共注射使基因產(chǎn)生移碼突變,，通過(guò)PCR篩選得到穩(wěn)定遺傳品系。2.基因敲除技術(shù)特點(diǎn)2.1通過(guò)將基因敲除斑馬魚(yú)品系與野生型相比較,，研究者可以揭示特定基因的功能。2.2在基因組水平上將目標(biāo)基因敲除,，遺傳背景干凈清晰,，是研究基因功能的金標(biāo)準(zhǔn)。服務(wù)流程▲根據(jù)客戶(hù)提供的GeneID或Genename進(jìn)行基因分析——▲cas9mRNA和多個(gè)gRNA靶點(diǎn)的設(shè)計(jì)及合成——▲高效gRNA靶點(diǎn)的篩選及效率驗(yàn)證——▲F0代斑馬魚(yú)的可遺傳性篩選——▲雜合子F1代斑馬魚(yú)的基因型鑒定環(huán)特生物優(yōu)勢(shì)成熟的基因敲除技術(shù)快速獲得穩(wěn)定品系,；多靶點(diǎn)共注射F0代驗(yàn)證基因功能,。陜西斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)的可靠性使用斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)申報(bào) CFDA 臨床試驗(yàn),。

斑馬魚(yú)是功能基因組是科學(xué)研究中比較重要的模式生物之一，已經(jīng)推動(dòng)了遺傳學(xué),、發(fā)育生物學(xué)、分子細(xì)胞生物學(xué),、神經(jīng)科學(xué)和疾病研究等多個(gè)領(lǐng)域的研究與應(yīng)用發(fā)展,。斑馬魚(yú)具有胚胎透明、體外發(fā)育等特點(diǎn),，在受精后48小時(shí)內(nèi)基本形成，所有發(fā)育階段的胚胎均可在顯微鏡下操作和觀(guān)測(cè),，不但可以直接觀(guān)察和追蹤基因和細(xì)胞在發(fā)育中的行為，而且易于在整體動(dòng)物模型中研究其調(diào)控機(jī)制,。斑馬魚(yú)個(gè)體小,，易于低成本地在實(shí)驗(yàn)室大量養(yǎng)殖，遺傳學(xué)和胚胎學(xué)操作比小鼠等哺乳動(dòng)物模型更易于掌握，適合多種疾病模型的建立。另外,，斑馬魚(yú)胚胎產(chǎn)量高,，可以用高通量方法篩選與基因和細(xì)胞功能相關(guān)的小分子化合物,。

身體透明,，斑馬魚(yú)在發(fā)育的前7天身體透明，可直接觀(guān)察內(nèi)部***,。結(jié)合***染料,、抗體,、核酸探針等方法能夠觀(guān)察自由活動(dòng)的或者固定后的斑馬魚(yú)***樣本,，這種直接的觀(guān)察為自動(dòng)化藥物篩選和藥物靶***鑒別奠定了堅(jiān)實(shí)有利的基礎(chǔ),。斑馬魚(yú)和人類(lèi)的疾病信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路高度保守。斑馬魚(yú)體內(nèi)存在的人類(lèi)同源基因比例高達(dá)87%,，某些疾病相關(guān)基因與人類(lèi)基因保守性高達(dá)99%,這意味著在其身上做藥物實(shí)驗(yàn)所得到的結(jié)果在多數(shù)情況下也適用于人體,。在已知生物中,，魚(yú)類(lèi)是**早具備獲得性免疫系統(tǒng)的綱,。這就使得對(duì)斑馬魚(yú)免疫系統(tǒng)的研究成為人們了解非特異性免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)進(jìn)化與功能相互關(guān)系的重要工具。這個(gè)獨(dú)特的免疫系統(tǒng)進(jìn)化地位還賦予了斑馬魚(yú)作為免疫學(xué)研究模式生物的另一重要優(yōu)勢(shì),，即其成體可以在沒(méi)有胸腺,、淋巴細(xì)胞生成的情況下存活傳代,。斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)的常見(jiàn)問(wèn)題。

成功除了努力還需要借助科學(xué)的方法和先進(jìn)的工具。斑馬魚(yú)模型的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)使其能夠?qū)ΜF(xiàn)有的有體外實(shí)驗(yàn)和哺乳動(dòng)物組成的傳統(tǒng)藥物研發(fā)模式,，斑馬魚(yú)既可以作為體外實(shí)驗(yàn)和哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)之間的橋梁,，在早期淘汰大量成***不佳的候選化合物,，減少哺乳動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段的時(shí)間和費(fèi)用成本,。同時(shí),，一些靠現(xiàn)有方法很難解決的藥效和安全性評(píng)價(jià)模型可以通過(guò)斑馬魚(yú)來(lái)解決,，打破實(shí)驗(yàn)技術(shù)方面的瓶頸和束縛,；另外，利用斑馬魚(yú)模型,，我們可以在一些特定靶向藥物的開(kāi)發(fā)上采用新的研發(fā)模式，從斑馬魚(yú)篩選開(kāi)始,，將活性與安全性較好候選化合物篩選出來(lái)后,，同時(shí)開(kāi)展體外機(jī)制研究和哺乳動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn),，通過(guò)這種模式，可以大幅縮短早期研發(fā)周期,、節(jié)省研發(fā)成本、提高藥物發(fā)現(xiàn)的成功率,。化學(xué)品斑馬魚(yú)胚胎和卵黃囊仔魚(yú)階段的短期毒性試,。海南北大關(guān)于斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)

斑馬魚(yú)模型和技術(shù)研究,。湖南斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型

保持首先,，斑馬魚(yú)非常強(qiáng)壯,，易于維護(hù),。由于它們是在池塘中自然發(fā)現(xiàn)的,，它們的理想條件可以很容易地復(fù)制,。他們也很便宜；然而,，它們確實(shí)需要比其他模型生物如蒼蠅更多的空間,。這種模式也是脊椎動(dòng)物，這使它優(yōu)于其他模式,。生殖斑馬魚(yú)的繁殖力非常高，每周產(chǎn)數(shù)百個(gè)卵,。他們也有很短的生成時(shí)間，這意味著科學(xué)家有一個(gè)永無(wú)止境的供應(yīng)這種模式,。這縮短了整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程，并且在突變體生產(chǎn)中特別有用,。另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是斑馬魚(yú)卵是從外部發(fā)育的，科學(xué)家可以很容易地研究它們**初的發(fā)育過(guò)程,。這是一個(gè)優(yōu)于其他模型,，如小鼠，發(fā)展內(nèi)部,，因此阻礙視覺(jué)調(diào)查。湖南斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型