早期空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的另一條發(fā)展路線是基因捕獲和增強(qiáng)子捕獲篩選,,開發(fā)于二十世紀(jì)八十年代,,當(dāng)時(shí) DNA 測(cè)序通量正在增加,動(dòng)物基因組是新開放的前沿領(lǐng)域,。果蠅和小鼠的篩選是在八十年代后期進(jìn)行的,,目的是觀察未靶向且通常未知的基因表達(dá)情況。隨著通量的增加,,增強(qiáng)子和基因捕獲技術(shù)在九十年代成為空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)的技術(shù),,直到 WMISH 在九十年代后期興起,。WMISH 技術(shù)的自動(dòng)化程度較高,避免了對(duì)轉(zhuǎn)基因品系的依賴,,同時(shí)由于在二十一世紀(jì)初獲得物種的參考基因組信息變得越來(lái)越便利,,探針設(shè)計(jì)因此也更為方便??臻g轉(zhuǎn)錄組使得我們?cè)跈z測(cè)基因表達(dá)的同時(shí)獲得基因在組織內(nèi)部的空間位置信息,。遼寧空間轉(zhuǎn)錄組使用
如果只是通過(guò)空間轉(zhuǎn)錄組或者單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組,研究人員在兩個(gè)樣本中均可以發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞相關(guān)基因或者淋巴細(xì)胞群,,無(wú)法解釋兩個(gè)樣本預(yù)后之間的差異,。但是通過(guò)空間轉(zhuǎn)錄組,就能很清晰看到兩個(gè)樣本之間的差異,。作者借助空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)探究人類心臟在發(fā)育過(guò)程中的基因表達(dá)特征和細(xì)胞圖譜變化,,發(fā)現(xiàn)對(duì)于每個(gè)發(fā)育階段的不同解剖區(qū)域,都有獨(dú)特的基因表達(dá)特征,。結(jié)合單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),,作者進(jìn)一步確定和豐富了胚胎心臟基因表達(dá)的空間注釋信息。 應(yīng)用空間轉(zhuǎn)錄組多少錢研究的***主要集中于人類和小鼠的大腦,,而其他***(例如肝臟)的空間轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究相對(duì)滯后,。
1. 空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟A。切片制備和優(yōu)化:取新鮮組織,、冷凍,、切片,并進(jìn)行HE染色成像,,優(yōu)化確定切片是否覆蓋靶向區(qū)域,。空間轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟B,。切片固定和透化:將組織切片放置在含有與RNA結(jié)合捕獲探針的載玻片上,,并進(jìn)行固定和透化,使細(xì)胞中的 mRNA 得到釋放,,并結(jié)合到相應(yīng)的捕獲探針上,,從而獲取基因表達(dá)信息??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟c。逆轉(zhuǎn)和文庫(kù)構(gòu)建:以捕獲的 RNA 為模板,,進(jìn)行 cDNA 合成,,和測(cè)序文庫(kù)制備??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟d,。高通量上機(jī)測(cè)序:對(duì)制備好的測(cè)序文庫(kù),,進(jìn)行二代高通量短讀長(zhǎng)測(cè)序??臻g轉(zhuǎn)錄組實(shí)驗(yàn)步驟e,。數(shù)據(jù)可視化分析:結(jié)合HE結(jié)果,確定哪些基因有表達(dá),,表達(dá)量高低,,以及這些基因的空間位置信息。
歐易生物自引進(jìn)10x Visium空間轉(zhuǎn)錄組以來(lái)已經(jīng)完成了上百例樣本測(cè)序,,在樣本包埋,、切片、實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析上積累了大量寶貴的經(jīng)驗(yàn),。本次培訓(xùn)班旨在跟廣大科研工作者介紹空間轉(zhuǎn)錄組的研究熱點(diǎn)和方案設(shè)計(jì),,分享歐易生物在樣本處理、實(shí)驗(yàn)和數(shù)據(jù)挖掘上的成功經(jīng)驗(yàn),,助力各位科研工作者取得新的突破,。招生對(duì)象:A、對(duì)空間轉(zhuǎn)錄組感興趣,,期望了解空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù),,或近期準(zhǔn)備開展空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序項(xiàng)目B、項(xiàng)目已經(jīng)開展,,需要深入挖掘數(shù)據(jù)的科研工作者,。空間轉(zhuǎn)錄組是一種用于從空間層面上解析RNA-seq數(shù)據(jù)的技術(shù),,從而解析單個(gè)組織切片中的所有mRNA,。
10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組的實(shí)現(xiàn)原理是什么?10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫(kù)構(gòu)建的每張載玻片上有四個(gè)捕獲區(qū)域,,每個(gè)捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,,包含5000個(gè)被條形碼標(biāo)記的點(diǎn)(barcoded spots),每個(gè)點(diǎn)的直徑為55 μm,,點(diǎn)和點(diǎn)之間中心的距離為100 μm,,并且每個(gè)點(diǎn)都有一個(gè)barcode序列。組織切片的細(xì)胞中會(huì)釋放出mRNA,,遷移到每個(gè)spot的mRNA會(huì)被標(biāo)記上相應(yīng)的barcode序列,,然后進(jìn)行文庫(kù)構(gòu)建并進(jìn)行測(cè)序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,,以確定哪些數(shù)據(jù)來(lái)自哪個(gè)位置,,從而實(shí)現(xiàn)空間基因表達(dá)的可視化。 10x Genomics空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)可以應(yīng)用于免疫,、發(fā)育,、神經(jīng)和病理等研究方向,。福建技術(shù)空間轉(zhuǎn)錄組
空間轉(zhuǎn)錄組可以進(jìn)行細(xì)胞間通訊分析,區(qū)別在于空間位置信息可以同時(shí)用于識(shí)別潛在的細(xì)胞間相互作用,。遼寧空間轉(zhuǎn)錄組使用
空間轉(zhuǎn)錄組的應(yīng)用有哪些,?一、發(fā)現(xiàn)疾病的空間異質(zhì)性:同時(shí)了解患病組織中的細(xì)胞類型及其定位有助于解決空間分辨的轉(zhuǎn)錄組學(xué)問(wèn)題,。在不同的環(huán)境下,,明智地選擇這些方法在生物學(xué)研究中也是至關(guān)重要的,例如在神經(jīng)科學(xué)中,,基于FISH的方法很普遍,;基于LCM的方法適用于小樣本(例如臨床樣本)以及整個(gè)轉(zhuǎn)錄組或基因組分析。二,、構(gòu)建空間轉(zhuǎn)錄組圖譜:借助于空間分辨的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué),,建立圖譜可能是在分子水平上研究生物體結(jié)構(gòu)的重要步驟。目前的多項(xiàng)研究通過(guò)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組技術(shù)結(jié)合空間轉(zhuǎn)錄技術(shù),,得到多個(gè)***的時(shí)空轉(zhuǎn)錄組圖譜(相關(guān)研究后續(xù)會(huì)在如下專輯更新),。遼寧空間轉(zhuǎn)錄組使用
上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司擁有檢驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)。(依法須經(jīng)批準(zhǔn)的項(xiàng)目,,經(jīng)相關(guān)部門批準(zhǔn)后方可開展經(jīng)營(yíng)活動(dòng),,具體經(jīng)營(yíng)項(xiàng)目以相關(guān)部門批準(zhǔn)文件或許可證件為準(zhǔn))一般項(xiàng)目:生物醫(yī)藥產(chǎn)品、生化產(chǎn)品的研發(fā),,醫(yī)藥中間體,、化工原料及產(chǎn)品(除危險(xiǎn)品化學(xué)品、監(jiān)控化學(xué)品,、易制毒化學(xué)品)的研發(fā),、銷售,儀器儀表的銷售,,并提供相關(guān)技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù),會(huì)務(wù)服務(wù),,企業(yè)管理咨詢,。等多項(xiàng)業(yè)務(wù),主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋科研服務(wù),,科研檢測(cè),,學(xué)術(shù)研究,技術(shù)咨詢,。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工,,為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長(zhǎng)空間,為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù),深受員工與客戶好評(píng),。上海歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司主營(yíng)業(yè)務(wù)涵蓋科研服務(wù),科研檢測(cè),,學(xué)術(shù)研究,,技術(shù)咨詢,堅(jiān)持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù),、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴,。公司憑著雄厚的技術(shù)力量,、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng),、良好的職業(yè)道德,,樹立了良好的科研服務(wù),科研檢測(cè),,學(xué)術(shù)研究,,技術(shù)咨詢形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可,。