微量元素在細胞內通常以與有機物結合的形式存在。其中鐵在細胞中參與氧的轉運,;鈷是維生素B12的組成部分,,參與葉酸的合成和脂肪酸的合成;鎳能夠***脫氧核糖核酸酶,、乙酰輔酶A合成酶等在細胞內具有重要功能的酶,,還具有穩(wěn)定核酸結構的功能;亞硒酸鈉中的硒,,作為谷胱甘肽過氧化物酶的輔基,,具有抗過氧化物能力,參與消除細胞內的脂肪酸過氧化物,,提高細胞的生長速率和活性,。在低血清、無血清細胞培養(yǎng)基中,,為滿足細胞生長增殖需要,,常常添加一些成份:蛋白質、多肽,、核苷,、嘌呤、檸檬酸循環(huán)的中間產物,、脂類,、及一些血清替代因子等。其中蛋白質具有重要的作用,,動物細胞對許多物質(難溶于水的離子或脂類物質)的攝取需要借助蛋白質的傳遞作用,,如白蛋白、傳遞蛋白,、貼壁蛋白等能夠攜帶脂肪酸,、***,、礦物質等促進細胞生長。轉鐵蛋白是一種重要的傳遞蛋白,,能夠結合鐵,,促進細胞對鐵離子的吸收,并具有***作用,,其促生長作用可能與其具有生長因子的功能有關,。胰島素可促進細胞對葡萄糖和氨基酸的利用,商業(yè)化中一些生長因子以重組蛋白形式添加到培養(yǎng)基中,,主要用來刺激細胞增殖,,并可促進糖元和脂肪酸的合成。乙醇胺是一種重要的刺激細胞生長的化合物,,是腦磷酸的合成前提,。使用減血清培養(yǎng)基能減少實驗中的血清干擾。湖南減血清培養(yǎng)基產品介紹
將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導實驗,;b,、**消毒:于無菌環(huán)境下,將挑選的種子置于無菌三角瓶中,,用無菌水清洗3-5次,,75%酒精搖動清洗5min,無菌水清洗3-5次,,5%naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s),,清水洗3-5次,種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去,。(2)配制誘導培養(yǎng)基:cs基本培養(yǎng)基+,,用超純水溶解,,。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示,。(3)愈傷**的誘導方法:用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導培養(yǎng)基,胚貼于培養(yǎng)基表面,;于溫度24-26℃,、濕度50-70%、光照強度1500-2500lux,、光照和黑暗交替(光照時間16h,、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)cs誘導培養(yǎng)基的誘導結果為:水稻成熟胚愈傷**誘導時,,經cs誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產生大量淡黃色結構致密的團狀愈傷**,出愈率為100%,。如圖7所示,。對比培養(yǎng)例7:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,,其余完全同培養(yǎng)實例7,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示,。ms誘導培養(yǎng)基的誘導結果為:水稻成熟胚愈傷**誘導時,,經ms誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產生大量淡黃色結構致密的團狀愈傷**,出愈率為100%,。如圖7所示,。四川DMEM高糖培養(yǎng)基生產企業(yè)F12培養(yǎng)基含有豐富的營養(yǎng)物質,支持細胞的生長,。
但其引入的尿素和**銨成分含量過高,,這對多種植物生長不利;cna一種植物**培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基及cna一種無nh4no3植物**培養(yǎng)用培養(yǎng)基分別公開了一種無硝酸培養(yǎng)基,,獲得較好的培養(yǎng)效果,,但新引入的硝酸鈣和硝酸鎂兩種成分均為易制爆試劑;cna一種植物組培**培養(yǎng)基公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基,,可提高植物組培成功率,,但引入了易制爆試劑硝酸鈉,且其*適用于植物離體培養(yǎng),,不具有通用性,。此外,現(xiàn)有的植物**培養(yǎng)基,,包括ms,、b5、n6以及其他公開的植物**培養(yǎng)基,,它們被用于配制液體培養(yǎng)基時的ph值波動大,,在用于植物水培時均需要調節(jié)ph,過程繁瑣,,耗費時間,。因此,急需一種既無硝酸銨,、也不引入新的易制爆成分,,并且培養(yǎng)效果與ms培養(yǎng)基相當或優(yōu)于ms培養(yǎng)基的***適用于多種植物**培養(yǎng)的ph穩(wěn)定型培養(yǎng)基。技術實現(xiàn)要素:有鑒于此,,本發(fā)明的目的是提供一種在不額外引入易制爆成分的前提下,,去除了市場禁止流通的易制爆成分nh4no3,且ph穩(wěn)定的***適用于多種植物**培養(yǎng)的植物基本培養(yǎng)基,,以解決現(xiàn)有植物**培養(yǎng)基存在的技術問題,。本發(fā)明廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg,、,。
3)培養(yǎng)方法:將配制的1/2cs生長培養(yǎng)基分裝于長,、寬、高9cm的耐高溫培養(yǎng)盒中,,用移液槍吸取帶有無菌水的無菌種子,,吹打在無菌濾紙上,用無菌尖頭鑷子將種子均勻點播在培養(yǎng)基上,;于溫度22-24℃,、濕度50-70%、光照強度1500-2000lux,、光照和黑暗交替(光照時間16h,、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)1/2cs生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2cs生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,,培養(yǎng)16d的幼苗,,表現(xiàn)為植株健壯,蓮座葉均已伸展,,葉色濃綠,,根系發(fā)達、平均主根長為,。如圖1所示,。對比培養(yǎng)例1:將1/2cs基本培養(yǎng)基替換為1/2ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例1,,1/2ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示,。1/2ms生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)結果為:哥倫比亞型擬南芥種子在1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率為100%,培養(yǎng)16d的幼苗,,表現(xiàn)為植株健壯,,蓮座葉部分伸展,葉色濃綠,,根系發(fā)達,、平均主根長為。如圖1所示,。培養(yǎng)實例1和對比培養(yǎng)例1的培養(yǎng)結果比較:哥倫比亞型擬南芥在1/2cs生長培養(yǎng)基和1/2ms生長培養(yǎng)基上的萌發(fā)率均為100%,;在相同條件下培養(yǎng)16d時,與1/2ms生長培養(yǎng)基相比,,1/2cs生長培養(yǎng)基中的幼苗長勢更佳,,主要表現(xiàn)為蓮座葉長勢更好、根系更為發(fā)達,。如圖1所示,。減血清培養(yǎng)基提高了實驗結果的可靠性。
附圖說明圖1是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,,哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,,a:無菌苗在培養(yǎng)基中生長情況,;b:無菌苗蓮座葉及根系發(fā)育;c:萌發(fā)率,;d主根長度;a和b中bar=,;圖2是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,,蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況,;b:無菌植株地上部分及根系發(fā)育,;c:無菌植株花***發(fā)育(左)和花粉的亞歷山大染色(右);d:主根長度,;e:株高,;f:蓮座葉長度;g:成熟花粉活力,;a中bar=,、b中bar=、c中花***bar=,、c中花粉bar=15um,;圖3是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,油菜無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況,;b:無菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高,;d:莖中粗,;e:主根長;f:大于,;a中bar=,、b中bar=;圖4是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,,馬鈴薯無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗地上部分及根系發(fā)育,;c:莖高,;d:莖中粗;e:根數(shù),;a和b中bar=,;圖5是cs和ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥葉片及根愈傷**誘導的對比效果圖,,a:葉片愈傷**,;b:葉片愈傷**誘導率,;c:根愈傷**;d:根愈傷**誘導率,;a和c中bar=,;圖6是cs和ms兩種培養(yǎng)基上。F12培養(yǎng)基常用于神經細胞和其他敏感細胞系,。四川DMEM高糖培養(yǎng)基生產企業(yè)
MEM培養(yǎng)基在細胞實驗中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性,。湖南減血清培養(yǎng)基產品介紹
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