對一般細胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝,，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,，機械攪拌對酶是一種沖擊,，如果起沫，酶就變性了,。低溫,，防止酶失活對難消化的細胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡合Ca2,，增加消化效力胰蛋白酶是一種動物源性產(chǎn)品,，是培養(yǎng)細胞過程中常用的酶。海南國產(chǎn)胰酶哪個好

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:1.研究的對象是活細胞在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控,、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài),、結構、生命活動等,。2.研究條件可以人為控制pH,、溫度、氧氣,、二氧化碳,、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理,、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下,。3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。4.研究內(nèi)容便于觀察,、檢測和記錄采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡,、熒光顯微鏡、電子顯微鏡,、流式細胞術,、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學,、原位雜交,、同位素標記等各種儀器設備,。河北進口胰酶進貨價胰酶在PH值7.2-8.0的時候，溶液呈淡紅色,。

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機化合物,，常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+,、Ca2+,、Mn2+、Fe2+等二價金屬離子結合的螯合劑,。動物細胞在粘附的時候,，需要有Ca或Mg離子的參與,，EDTA與他們結合后,，導致動物細胞粘附能力降低，再加上胰蛋白酶的消化作用,，使得細胞與瓶壁快速脫離,。兩者起到了協(xié)同消化的作用。難消化的細胞,，胰酶中可填加EDTA,。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重,。如果影響貼壁,，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，可離心棄上清,，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA,。如果對貼壁沒影響,，那么可不離心。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶,。一般濃度在0.25-0.5%,。作用時間根據(jù)干細胞種類、作用溫度等因素而變化很大,，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細胞，在37度條件下,，一般消化1-5分鐘就足夠了,。終止是用血清。主要作用于干細胞間,。配制時不能用含鈣,、鎂的平衡液,，否則影響活性。保存于-20度,。膠原酶：膠原酶是比較少用的,，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下干細胞,。這種方法作用溫和,，對干細胞損傷較小，但是,，價格也較貴,。中止同樣是用血清。胰酶的質量是影響干細胞的消化的關鍵因素之一,，如果配的比較標準,，消化的時候就容易消化，反之就不易消化,。還要在你看到消化過頭的情況下,，如果干細胞下來的比較多了，這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳,。營養(yǎng)液中有血清,，胰酶遇到血清就會自動終止消化，但這樣操作對干細胞是有一定的影響的,。對于容易消化的干細胞,，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s）,，棄之,，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細胞消化的難易程度），棄之,，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細胞消化單細胞,。培養(yǎng)細胞時，胰酶和雙抗該怎么用,？

細胞傳代消化時所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑),，半貼壁細胞或者對胰酶敏感的細胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進行細胞消化,。由于細胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性,，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進行細胞消化,。胰酶對細胞膜上粘附蛋白的損害比較大,，如果進行細胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細胞消化試劑,，盡量減少對細胞膜上蛋白的損傷,。此外,，由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會自己剪切自己,建議胰酶不要反復凍融,，拿到手中的大瓶胰酶進行分裝使用,。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染,。海南國產(chǎn)胰酶哪個好

實際消化后細胞狀態(tài)不會有太大差異,，注意控制消化時間即可。海南國產(chǎn)胰酶哪個好

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎,？能,，對于胰酶呈黃色的問題，不同品牌也都對此現(xiàn)象進行了測試實驗,。變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離,，請放心使用。細胞消化時,，胰酶不去除對細胞的影響,？細胞消化時,，如果消化液中只有胰酶,，不含EDTA，不去除是沒有問題的,。如果消化液中含有胰酶和EDTA,，比較好去除。EDTA是一種化學螯合劑,，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子，使細胞分離,。但EDTA不能被血清中和,，消化后要徹底清洗去除，否則細胞易脫壁,。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,，所以常二者合用。胰酶的保存海南國產(chǎn)胰酶哪個好