1,、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中為什么要使用胰酶呢,？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點(diǎn)是肽鏈的Lys或Arg兩個(gè)殘基的羧基端肽鏈,，通過(guò)在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離,。這時(shí)，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點(diǎn)2,、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用胰酶消化時(shí)發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過(guò)程,，這是什么原因,？血清終止的原理其實(shí)是競(jìng)爭(zhēng)抑制，就是用過(guò)量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合,，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機(jī)會(huì),。3、為什么使用了胰蛋白酶消化,，細(xì)胞還是成團(tuán)的,，這可能是什么原因?qū)е碌模竣傧瘯r(shí)間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過(guò)高之后才消化傳代⑤胰酶存儲(chǔ)不當(dāng),，或者使用了過(guò)期胰酶變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,，請(qǐng)放心使用,。遼寧國(guó)產(chǎn)胰酶進(jìn)貨價(jià)

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%,。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類,、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞,，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了,。終止是用血清,。主要作用于干細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣,、鎂的平衡液,，否則影響活性。保存于-20度,。膠原酶：膠原酶是比較少用的,，一般是用原代培養(yǎng)時(shí)，從組織消化下干細(xì)胞,。這種方法作用溫和,，對(duì)干細(xì)胞損傷較小，但是,，價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清,。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一,，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時(shí)候就容易消化,，反之就不易消化,。還要在你看到消化過(guò)頭的情況下，如果干細(xì)胞下來(lái)的比較多了,，這時(shí)可以連同cmf或pbs加上營(yíng)養(yǎng)液一起傳,。營(yíng)養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化,，但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的,。對(duì)于容易消化的干細(xì)胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶,，先中和血清的作用（30s）,，棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度）,，棄之,，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞,。遼寧國(guó)產(chǎn)胰酶進(jìn)貨價(jià)適用于貼壁細(xì)胞的消化傳代；也可用于組織細(xì)胞分離的初步消化,。

胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來(lái)分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過(guò)程它可以被看成一種簡(jiǎn)單的動(dòng)力學(xué)過(guò)程,，它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì)，然后這些留下的物質(zhì)可以用來(lái)維持細(xì)胞的高能量水平這種過(guò)程通過(guò)將脂肪,、蛋白質(zhì),、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來(lái)發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子,，通常有四種類型,，它們是肽酶，脂水解酶,，載脂蛋白酶和糖水解酶,，分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪,、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子,，以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì)，維持其自身的正常功能和形態(tài),。

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細(xì)胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法,、離子螯合劑、物理法和冷凍法,。其中**常用的是酶消化法,。酶消化法：貼壁干細(xì)胞酶消化傳代時(shí)通常采用兩種方式：1、加入胰酶等干細(xì)胞脫落后,，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,，離心傳代；2,、加入胰酶后,，鏡下觀察待干細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí)，棄去胰酶,，加入培養(yǎng)液并分瓶,。但前者太麻煩，而后者有可能對(duì)干細(xì)胞施加胰酶選擇,，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的干細(xì)胞先脫落,。胰酶和胰蛋白酶不一樣，前者包括后者,。

    在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin),，EDTA等,。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶,，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),，破壞細(xì)胞間的連接,，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在℃時(shí),，胰酶的作用能力**強(qiáng),，因此使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間,，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為,，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化,。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用,，以增強(qiáng)解離效果。但是對(duì)于EDTA可能會(huì)干擾后續(xù)的測(cè)試分析時(shí),，推薦選擇不含EDTA的消化液,。本產(chǎn)品含有(Trypsin)，溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,，經(jīng)過(guò)濾除菌,，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化。為改良型,，除了具有方便快速、穩(wěn)定安全,、細(xì)胞狀態(tài)好等特點(diǎn)之外,，消化時(shí)間更短，消化效果媲美進(jìn)口產(chǎn)品,，特別適用于難消化的細(xì)胞,。 胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差,。山東EDTA胰酶哪家便宜

消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的,？遼寧國(guó)產(chǎn)胰酶進(jìn)貨價(jià)

在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液,。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,，EDTA 等,。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞,。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在PH 8.0和37℃時(shí),，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷,。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果,。遼寧國(guó)產(chǎn)胰酶進(jìn)貨價(jià)