可通過在細胞培養(yǎng)基中添加一些保護劑,，降低細胞-氣體和細胞-液體的表面張力,，減少氣泡的形成。4.細胞培養(yǎng)基的**及儲存**方式及注意事項細胞培養(yǎng)基**的方式分為高壓**和膜過濾**,，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同,，**方式也可能不同。①高壓**某些培養(yǎng)基（如MEM）可進行高壓**,，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,，一般是在培養(yǎng)基高壓**后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺,?？筛邏?*的培養(yǎng)基在121℃、15psi,，15分鐘的條件下完全可達到**效果及營養(yǎng)成分的**小損失,，不需將**時間延長。絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓**,。因培養(yǎng)液中常含有維生素,、蛋白質(zhì)、多肽,、生長因子等物質(zhì),，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能,，因而上述液體多采用過濾消毒以除去**?？晒┻^濾**使用的濾膜很多,，其材料多為polyethersulphone（PES）、尼龍,、多聚碳酸鹽,、醋酸纖維素、硝酸纖維素,、PTFE,、陶瓷等。膜過濾**是當前較為常用及便捷的一種方法,，常采用μm孔徑的濾膜,，部份采用μm孔徑。與高壓過濾方式相比,，濾膜具有使用期限且價格較高,，但對細胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。通常液體細胞培養(yǎng)基避免-20℃凍存,。無血清培養(yǎng)基適用于需要無血清環(huán)境的細胞,。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

    這些重組蛋白和動物來源成分對生物制品的安全性有很大影響。成本低,。主要用途應用案例采用199(SLM),、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細胞、BHK21細胞和CHO細胞,，新生牛血清用量可以從10％降至3％,，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響，減少生物制品純化損失,，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來干擾和差異的風險,，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶,、3L轉(zhuǎn)瓶,、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應器中培養(yǎng)細胞，在*苗生產(chǎn)中可以達到低血清高密度的培養(yǎng)效果,。低血清培養(yǎng)基營養(yǎng)成分優(yōu)于基礎培養(yǎng)基,，易使細胞增殖迅速，代謝旺盛,，代謝產(chǎn)物對細胞有不良影響,，易產(chǎn)生細胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當增加換液次數(shù),，增加傳代頻率,。獲取同樣的細胞量,，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時間，可提高生產(chǎn)效率,。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細胞分泌狂犬*苗病毒,，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細胞,，在本實驗情況下12代內(nèi)細胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況,，因而可以預期其產(chǎn)生的口蹄*、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高,。低血清培養(yǎng)基用于反應器Vero細胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實踐證明效果良好,。采DMEM,。湖南MEM a培養(yǎng)基進貨價F12培養(yǎng)基在組織工程和再生醫(yī)學中有廣泛應用。

    維持15-20分鐘,，可殺滅所有的繁殖體和芽胞,。本法適用于耐高溫、耐濕物品的**,，如普通培養(yǎng)基,、生理鹽水、手術敷料等,。（二）下向主要介紹高壓蒸氣**器**效果的驗證方法高壓蒸氣**器使物品**后達到無菌要求,，這是**實驗中的基本保證。高壓**器**效果是否合格足實驗成敗的**基礎**關鍵的首要步驟,。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,，不需高壓**外，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓**15-30分鐘,。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基**不徹底,，直接關系到對**的無菌試驗結(jié)果。因此必須認真對高壓**器進行**效果的驗證,。為此我們提供了進行**效果驗證的一個簡易可行的方法,。1．試驗材料(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌,，含芽胞量5-lO5CFU/片,。(2)121℃壓力蒸氣**化學指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓**20分鐘后備用,。(4)O—150℃留點溫度計,。2．方法與結(jié)果將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中?；瘜W指示卡和留點溫度計放入敞口試管中,。以上兩種試管各準備5-10份,。分別放置在高壓**器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處,。如**器為二層,，則需放10處。

    另外,，酚紅作為pH值的指示劑被加入到細胞培養(yǎng)基中,。酚紅在產(chǎn)物純化過程中會造成干擾，并且具有一定的固醇類***樣作用,，如雌***樣作用,。當用于哺乳類動物細胞的培養(yǎng)，可能會發(fā)生一些固醇類反應?，F(xiàn)在商業(yè)化細胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整,。因生物反應器具有pH在線檢測技術，生物反應器培養(yǎng)動物細胞時,，酚紅可完全去除,。細胞保護劑是保護細胞免受滲透壓變化、剪切力,、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì),。在使用生物反應器培養(yǎng)動物細胞時，細胞易被機械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡,。為降低這種損傷,，除優(yōu)化生物反應器結(jié)構和生產(chǎn)工藝外，可在細胞培養(yǎng)液中添加一些保護劑,。其主要是通過改變細胞培養(yǎng)基物性或是對細胞具有保護作用的物質(zhì),，常用的種類有血清、白蛋白,、聚已二醇（PEG）,、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動物細胞在細胞培養(yǎng)基中不僅能存活,，還要分裂增殖,，合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件,。動物細胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,，適宜pH在～。細胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計來測定,。在細胞生長過程中,，隨細胞數(shù)量的增多和代謝活動的加強。減血清培養(yǎng)基提高了細胞實驗的可靠性和重復性。

    導致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效,?？刂萍毎囵B(yǎng)基中**和霉菌，是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一,。清大天一在參考《中華******典》2005版二部附錄第100頁的口服給*制劑的微生物限度標準,，并嚴于該標準，規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的**數(shù)每1g不得超過200個,，霉菌數(shù)每1g不得超過50個,。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解,，混勻即得試樣,。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行，檢查項目為**數(shù),、霉菌數(shù),。檢查法采用平皿法。細胞生長試驗這是一個性能特性表述的要求,。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞，因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品***劣的直觀表述,，這也是很多生物制*用戶要求的一項指標,。目前國內(nèi)尚無細胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法，可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術》中細胞計數(shù)法論述的內(nèi)容給出,。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng),，前四天用含10％小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)并計數(shù),，檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力,。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng)，觀察細胞形態(tài)并計數(shù),，檢查細胞培養(yǎng)基中是否有不利細胞生長的***,。本試驗用細胞為VERO細胞。四,、細胞培養(yǎng)基的使用方法細胞培養(yǎng)基的種類繁多,，細胞培養(yǎng)方式也較多。減血清培養(yǎng)基提高了實驗的可重復性,。福建MEM培養(yǎng)基價格

無血清培養(yǎng)基為細胞培養(yǎng)提供了純凈的背景,。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

    人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加一定量的血清使細胞生長和繁殖。組成及作用氨基酸：組成蛋白質(zhì)的基本單位,。不同的細胞對氨基酸的需求各異,，但幾種必需氨基酸細胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，如組氨酸,、異亮氨酸,、亮氨酸、賴氨酸,、蛋氨酸,、苯丙氨酸、蘇氨酸,、色氨酸,、纈氨酸、半胱氨酸,、酪氨酸等,。其余非必需氨基酸，細胞可以自己合成,，或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來,。絕大部分細胞對谷氨酰胺有較高的要求，因為谷氨酰胺是作為能源及碳源物質(zhì)同時被細胞利用,，是是細胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸,，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡,，所以各種培養(yǎng)液中都含有較多的谷氨酰胺,。細胞所能利用的氨基酸是L型同分異構體，D型氨基酸不能被利用,。維生素：維持細胞生長的一種生物活性物質(zhì),，對細胞代謝有重大作用。它們在細胞中大多形成酶的輔基或輔酶,，沒有它們,，酶便沒有活性，代謝活動將無法進行,。維生素分為水溶和脂溶兩大類,，的培養(yǎng)液中直接采用ATP和輔酶A。葡萄糖：大部分培養(yǎng)基都以葡萄糖作為能量來源之一,。無機鹽：維持培養(yǎng)基滲透壓平衡,，參與細胞的代謝活動。主要有Na+,、K+,、Ca2+、Mg2+等,。Na+是細胞外液中**主要的陽離子,，對維持滲透壓的恒定有決定性的作用,。福建RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑