1、細(xì)胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢,？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶,，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白,，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解,，從而使兩者分離。這時,，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形,。圖1.胰酶酶切位點2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞,，在使用胰酶消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程，這是什么原因,？血清終止的原理其實是競爭抑制,，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機會,。3,、為什么使用了胰蛋白酶消化，細(xì)胞還是成團的,，這可能是什么原因?qū)е碌?？①消化時間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲不當(dāng)，或者使用了過期胰酶胰酶PH值6.8左右時呈淡黃色,。福建進口胰酶介紹

    產(chǎn)品簡介產(chǎn)品簡介：產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱產(chǎn)品包裝產(chǎn)品價格C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml碧云天生產(chǎn)的胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含,。該消化液經(jīng)過過濾**，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,，或者一些**的消化,。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點，通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞,。包裝清單：產(chǎn)品編號產(chǎn)品名稱包裝C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml―說明書1份保存條件：4℃保存,，一年有效。注意事項：在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被**污染,。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長,，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差,。為了您的安全和**，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。使用說明使用說明：1.貼壁細(xì)胞的消化：a)吸去培養(yǎng)液,，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以去除殘余的血清,。b)加入少量胰酶細(xì)胞消化液，略蓋過細(xì)胞即可,，室溫放置30秒至2分鐘,。不同的細(xì)胞消化時間有所不同。c)顯微鏡下觀察,，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,。此時吸除胰酶細(xì)胞消化液,。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞,，即可直接用于后續(xù)實驗,。d)如果發(fā)現(xiàn)消化不足。云南EDTA胰酶介紹消化液經(jīng)過過濾除菌,，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,，或者一些組織的消化。

    6.磷酸酶EDTA相對不溶,?？梢杂么帕嚢杵鲾嚢瑁?qū)⑵渲糜?度的冰箱中,，溶解后過濾并**,。7.可配備2-3倍血漿酶，節(jié)省時間和過濾器,。使用時,，請對PBS消毒。8.將儲存溶液儲存在-20°C的冰箱中,，然后將溶液儲存在4°C,。使用時，請勿將其放在27°C的水浴中,，因為這會使自由基酶迅速無法使用,。使用前放置一次。是的,，因為添加的數(shù)量很少,，因此通常不會凍結(jié)細(xì)胞,。9.在消化過程中，向培養(yǎng)瓶中加入適量的胰酶,。個人經(jīng)驗,，一般在10cm培養(yǎng)皿中加。加入后,，立即搖動培養(yǎng)皿蓋住胰酶,。一旦充滿，用負(fù)壓吸引多余的胰酶排出,，將其加入37度培養(yǎng)箱中進行消化,。10.請注意，過量的胰酶對細(xì)胞有害,，而過量的EDTA也會影響粘附,，因此無需將細(xì)胞浸入血漿酶中進行消化。11.磷酸酶37具有**佳的消化作用,，并具有在37度以下消化的能力,。在消化過程中，甚至不需要將一些易于消化的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱中,。請注意,，它不能消化太長時間。四,、實驗所需試劑清單：序列產(chǎn)品名貨號CAS備注11000ul藍(lán)吸頭FT-10002氫氧化鈉JT86501310-73-23PBSHC14884EDTABSH-59-55螯合樹脂chelex100SS6072以上為EDTA-胰蛋白酶的配制,，實驗請選用高質(zhì)量試劑。

胰酶和雙抗怎么保存,？

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雙抗的保存:雙抗通常情況下在-20°C保存一年,。由于該試劑在4°C下長期存放是不穩(wěn)定的，分裝后在-20°C下避光保存,。青霉素在2-8°C存放時間不應(yīng)超過4天,，鏈霉素相對穩(wěn)定一點，在2-8°C可以存放30天左右,。雙抗從凍融后基本成分已開始降解,。胰酶的保存：胰酶可在-20°C下保存一年。隨著時間延長,，胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20°C冰箱取出,。盡量避免在4C長期保存,。 胰酶的使用濃度是多少,？

胰酶操作步驟：

(*供參考) ：1. 吸取培養(yǎng)基，用無菌的PBS,、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,，以除去殘余的血清。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液,，略蓋過細(xì)胞即可,。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量，室溫放置30秒至2分鐘,。（不同的細(xì)胞消化時間有所不同）3. 顯微鏡下觀察,，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀,；或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,。4. 此時吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,，吹打下細(xì)胞,，即可直接用于后續(xù)實驗。如果發(fā)現(xiàn)消化不足,，則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化,。 消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的？福建進口胰酶介紹

胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換,。福建進口胰酶介紹

    先用少許**過的PBS調(diào)成糊狀,，然后補足到100ml。置室溫攪拌4小時或冰箱內(nèi)過夜,，過濾**,，分裝，4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（左右）調(diào)成糊狀，然后再補足D-Hanks平衡鹽溶液,，攪拌混勻,，置室溫4小時或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩,；2.次日,，先用濾紙粗濾，再進行過濾**,，分裝入瓶中,，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫Ｓ脻舛葹榛?。胰蛋白酶溶液偏酸,，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右,。）一般**，至于作用效果,，需要消化一次細(xì)胞感覺一下,，因為不同廠家的酶不一樣，有的作用溫和,，有的作用劇烈,。4、是否需要四度放置過夜,，取決于你的胰酶的純度,。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解,，需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,，就沒有必要四度過夜。從理論上來說,，四度放置過夜,，給**生長的機會，盡管過濾可以出去**,，可是出不掉其代謝產(chǎn)物,。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因，考慮有：1,、過期或是酶已經(jīng)部分變性2,、溶液ph值不對3、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正?，F(xiàn)象,，因胰酶多取自動物胰腺，沉淀為**塊,。福建進口胰酶介紹