①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為,，胰淀粉酶活性為,，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為,、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,，然后進(jìn)行真空過濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋,，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,，備用,。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫,。然后稱取，加入10L異辛烷,，在攪拌下使其形成均勻的分散液,，再加入定量蒸餾水,，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,，獲得濃度為,。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次，,，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后,，均進(jìn)行離心分離，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,，時(shí)間10-15min收集、合并離心上層清液,，進(jìn)行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶,。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,，在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次,，每次萃取完成后，均進(jìn)行離心分離,，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時(shí)間為15-20min。分別收集、合并離心上層清液和下層反萃取液,，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶,。 變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用,。河北EDTA胰酶介紹

    胰酶使用注意：1,、在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。2,、胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長(zhǎng),，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。胰酶配制方法：1,、培養(yǎng)液配制,，方便好用，對(duì)細(xì)胞影響小,，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制,，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）②③④⑤⑥⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí),，調(diào)，過濾除菌,。）3、pbs（：稱取胰酶粉末,，先用少許滅菌過的PBS調(diào)成糊狀，然后補(bǔ)足到100ml,。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過夜，過濾滅菌,，分裝，4℃保存?zhèn)溆谩＃?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（）調(diào)成糊狀,，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液，攪拌混勻,，置室溫4小時(shí)或冰箱過夜，并不斷攪拌振蕩,；2.次日，先用濾紙粗濾,，再進(jìn)行過濾除菌，分裝入瓶中,，低溫冰箱保存?zhèn)溆茫Ｓ脻舛葹?。胰蛋白酶溶液偏酸,，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至。）一般,，至于作用效果,，需要消化一次細(xì)胞感覺一下，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,，有的作用溫和,，有的作用劇烈。4,、是否需要四度放置過夜,，取決于你的胰酶的純度,。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解,，需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高。 海南胰酶常見問題消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的,？

胰蛋白酶廣泛應(yīng)用于食品加工、制藥,、生化檢測(cè)和制革等多種行業(yè)。在制藥工業(yè)中,，胰蛋白酶可使天然蛋白、變性蛋白,、纖維蛋白和黏蛋白等水解為多肽或氨基酸,，以達(dá)到***的目的,。胰蛋白酶生物藥用于***呼吸道疾病,，可以溶解黏痰和膿性痰，還可以***毒蛇咬傷等,。由于血清中含有非特異性抑肽酶，故胰蛋白酶不會(huì)消化正常組織,，而能分解膿性痰等黏性分泌物,，促進(jìn)***、化療藥物向病灶滲透,。在食品工業(yè)中,，胰蛋白酶主要用于水解價(jià)值較高的動(dòng)植物性蛋白等，以牛乳為例,，利用胰蛋白酶水解其中的酪蛋白、α-乳白蛋白和β-乳球蛋白等致敏原,，能生產(chǎn)低敏配方奶粉。在制革工業(yè)中,，胰蛋白酶用于皮革脫灰軟化，也可以利用胰蛋白酶提取具有良好生物相容性和生物降解性的膠原蛋白,。[1]

對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶,，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾,，分裝,，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要,，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊,，如果起沫，酶就變性了,。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中,，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2,，增加消化效力胰酶在PH值7.2-8.0的時(shí)候，溶液呈淡紅色,。

    先用少許**過的PBS調(diào)成糊狀,，然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過夜,，過濾**，分裝,，4℃保存?zhèn)溆谩＃?或是hanks或是D-hanks液配制（1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,，先用少許D-Hanks平衡鹽溶液（左右）調(diào)成糊狀,，然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液,，攪拌混勻,，置室溫4小時(shí)或冰箱過夜,，并不斷攪拌振蕩,；2.次日,，先用濾紙粗濾，再進(jìn)行過濾**,，分裝入瓶中，低溫冰箱保存?zhèn)溆?，常用濃度為或,。胰蛋白酶溶液偏酸,，使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右,。）一般**，至于作用效果,，需要消化一次細(xì)胞感覺一下,，因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,，有的作用溫和,，有的作用劇烈,。4,、是否需要四度放置過夜,，取決于你的胰酶的純度,。過去的胰酶純度不高，所以難以溶解,，需要四度過夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,，就沒有必要四度過夜,。從理論上來說,，四度放置過夜，給**生長(zhǎng)的機(jī)會(huì),，盡管過濾可以出去**，可是出不掉其代謝產(chǎn)物,。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,，考慮有：1、過期或是酶已經(jīng)部分變性2,、溶液ph值不對(duì)3,、在沒過濾之前的絮狀沉淀是正常現(xiàn)象,，因胰酶多取自動(dòng)物胰腺,，沉淀為**塊,。胰蛋白酶消化液都由已經(jīng)過豬細(xì)小病毒檢測(cè)和支原體檢測(cè)的原料制備。上海EDTA胰酶

如果消化液中含有胰酶和EDTA,，好去除。河北EDTA胰酶介紹

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細(xì)胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑,、物理法和冷凍法,。其中**常用的是酶消化法,。酶消化法：貼壁干細(xì)胞酶消化傳代時(shí)通常采用兩種方式：1,、加入胰酶等干細(xì)胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,，離心傳代,；2,、加入胰酶后,，鏡下觀察待干細(xì)胞開始脫落時(shí)，棄去胰酶,，加入培養(yǎng)液并分瓶,。但前者太麻煩，而后者有可能對(duì)干細(xì)胞施加胰酶選擇,，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的干細(xì)胞先脫落,。河北EDTA胰酶介紹