第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗證消毒**在醫(yī)學(xué)實踐上有著重要意義,。它可切斷傳播途徑,、控制***擴(kuò)散造成的危害；也可殺滅物品或器皿上的**,，防止醫(yī)院***,；在醫(yī)學(xué)微生物檢驗的領(lǐng)域中，消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗不受外來微生物污染的前提,。（一）術(shù)語消毒(disinfection),、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis),、防腐（antisepsis）和無菌(asepsis)是常用術(shù)語,。下面就術(shù)語概念加以敘述。(1)**,。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法,。本法適用于制劑、原料,、輔料及醫(yī)療器械等物品的**,。（如外科器械、注射器,、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等,。）(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法,，但不包括**芽胞和非病原微生物,。如用酒精溶液浸泡體溫計、新潔爾滅液擦拭檢查臺等,。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑(dis-infectant),。一般而言，消毒對象是指物體而不是機(jī)體,。(3)防腐,。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等,。(4)無菌,。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱無菌操作。無菌即為不存在活的微生物,。用于消毒**的物理方法有熱力,、電離輻射、超聲波,、過濾等,。無血清培養(yǎng)基適用于需要無血清環(huán)境的細(xì)胞。江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑

    2-羥基乙胺可以促進(jìn)磷脂酰乙醇胺細(xì)胞壁組分的合成,，從而提高菌株增殖速率,，后期菌株增殖放緩，以產(chǎn)酸為主,，2-羥基乙胺還能夠作為陽離子表面活性劑,，使得細(xì)胞壁疏松，提高細(xì)胞通透性,，促進(jìn)谷氨酸釋放到發(fā)酵液,；cecl3稀土鹽能夠促進(jìn)菌株增殖，提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力,，提高谷氨酸的產(chǎn)量,；但是過高的濃度會造成菌株增殖放緩和死亡，谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降,；發(fā)酵中后期,，菌株增殖速度放緩，以產(chǎn)酸為主,，殼聚糖上的氨基與**細(xì)胞壁中帶負(fù)電荷的磷壁酸或脂多糖結(jié)合,，并螯合mg2+、ca2+等陽離子,從而改變細(xì)胞壁的通透性,，促進(jìn)谷氨酸分泌到胞外,。發(fā)酵培養(yǎng)基中添加了琥珀酸，三羧酸循環(huán)有一定促進(jìn)作用,，而對乙醛酸循環(huán)途徑具有**作用,，從而導(dǎo)致中間代謝物更多地流向三羧酸循環(huán)途徑，進(jìn)而促進(jìn)谷氨酸產(chǎn)量的增加,。說明書附圖圖1：cecl3稀土鹽對菌體濃度的影響,；圖2：cecl3稀土鹽對谷氨酸含量的影響；圖3：2-羥基乙胺對菌體濃度的影響,；圖4：2-羥基乙胺對谷氨酸含量的影響,；圖5：2-羥基乙胺對糖酸轉(zhuǎn)化率的影響,。具體實施方式為了使本技術(shù)領(lǐng)域：的人員更好地理解本申請中的技術(shù)方案,，下面將結(jié)合本申請具體實施例,，對本申請的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述,，顯然,。甘肅基礎(chǔ)培養(yǎng)基使用減血清培養(yǎng)基可以減少細(xì)胞培養(yǎng)中的血清干擾因素。

    MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng),，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力,。細(xì)胞培養(yǎng)過程中pH值下降產(chǎn)生的原因有很多。在細(xì)胞生長非?？鞎r,，pH值通常下降得很快，此時可以通過及時傳代,、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決,。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊,、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠,、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、**,、酵母或***污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快,。這時，可以通過以下幾種方法解決：1）增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度,。NaHCO3含量在,；2)改用不依賴CO2培養(yǎng)液；3)適當(dāng)松開瓶蓋,。在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液,，使終濃度為10~25mM；4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液,，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks’鹽配制的培養(yǎng)液,；5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用*****。酚紅在細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑,。一般情況下,，可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，但低血清或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同,，不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗來判定pH值,，建議使用pH計進(jìn)行測定。酚紅通常對含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生明顯影響,，也可通過純化技術(shù)去除,。

    體外動物細(xì)胞培養(yǎng)時需要大量谷氨酰胺,，利用量常超過其他必須氨基酸利用量的總和。維生素是維持細(xì)胞生長的生物活性物質(zhì),，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用,。維生素可分為水溶性和脂溶性兩類，水溶性維生素主要包括泛酸,、維生素B12,、葉酸、煙酰胺,、吡哆醛,、硫胺素、核黃素,、維生素C,、膽堿、肌醇等,；脂溶性維生素主要包括維生素A,、D、E,、K等,；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A；大部分培養(yǎng)基中還有生物素,。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分,，沒有它們，酶便沒有活性,，代謝活動將無法進(jìn)行,。比如，泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成?；d體蛋白和輔酶（如輔酶A）,，參與糖類、脂類和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng),；維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等,。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如,，DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍,，其原因是一方面不同種類維生素的作用不同，另一方面不同種類的細(xì)胞對維生素的需求也可能有較大差異,，相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同,。無機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動所不可缺少的營養(yǎng)成分，主要有Na+,、K+,、Ca2+,、Mg2+、Cl－,、PO43—,、SO42—、HCO3－等,，主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡,。無酚紅培養(yǎng)基確保了實驗結(jié)果的高度準(zhǔn)確性,。

    式中：N0—開始**（t=0）時原有活菌數(shù),；Nt----經(jīng)時間t后殘存活菌數(shù)。k：意義同上,；t：表示理論**時間k=（）logNt/N0,；比死亡速率常數(shù)K，K值大,，表明微生物容易死亡,。理論**時間的計算需要注意以下幾個問題：（1）K值因不同的微生物種類不同、不同的生理狀態(tài),、不同的外界環(huán)境,，差別很大，實質(zhì)上,，它是微生物熱阻的一種表示形式,，微生物的熱阻越大，K值也越小,?？梢匀∧蜔嵝匝挎邨U菌的K進(jìn)行計算。(2)在計算過程中,，N0,，Nt如何取值？N0為**開始時培養(yǎng)基中活微生物數(shù),，可以參考一般培養(yǎng)基中的活微生物數(shù)為（1-2）×107個/ml,；Nt通常取，既**失敗的概率為千分之一,。（3）上述**時間,，通常稱之為理論**時間，只可以用于工程計算中,，在實踐過程中,，因蒸汽的壓力問題（不穩(wěn)定）、蒸汽的流量問題有很大差別,，甚至培養(yǎng)基中的固體顆粒的大小,、培養(yǎng)基的粘度等因素,，都會影響**效果，實際的設(shè)計和操作計算時間可作適當(dāng)比例的延長或縮短,。在實際生產(chǎn)中,，通常采用經(jīng)驗數(shù)值：間歇**，121℃,，20—30分鐘,；連續(xù)**，137℃,，15—30s,，在維持罐中保溫8—20分鐘。4,、**溫度的選擇在培養(yǎng)基**過程中,，除了雜菌死亡，還伴隨著培養(yǎng)基成分的破壞,。因此必須選擇既能達(dá)到**目的,。使用減血清培養(yǎng)基減少了實驗中血清帶來的變異性。陜西減血清培養(yǎng)基一般多少錢

無酚紅培養(yǎng)基在細(xì)胞實驗中減少了干擾因素,。江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑

    生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻,，冷卻到40-50℃后，輸送到預(yù)先已經(jīng)**過的罐內(nèi),。（四）,、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點***是設(shè)備要求低,，不需另外設(shè)置加熱,、冷卻裝置；操作要求低,，適于手動操作,，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**,。缺點是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失較多,，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降；需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻,，能耗較高,；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**；發(fā)酵罐的利用率較低,。2,、連續(xù)**的***和缺點***是**溫度高，可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的損失,；操作條件恒定,，**質(zhì)量穩(wěn)定,；易于實現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復(fù)的加熱和冷卻,，提高了熱的利用率,；發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點是對設(shè)備的要求高,，需另外設(shè)置加熱,、冷卻裝置；操作較麻煩,；染菌的機(jī)會較多,；不適合于含大量固體物料的**；對蒸汽的要求高,。由此可見,，無論在理論上或者在實踐上，與間歇**過程相比,，連續(xù)**的***十分明顯。因此,，連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**,。江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑