本發(fā)明屬于氨基酸生產(chǎn)技術領域：,，具體涉及一種優(yōu)化的谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基,。背景技術：：谷氨酸，是一種酸性氨基酸,。分子內(nèi)含兩個羧基,，化學名稱為α-氨基戊二酸,。谷氨酸是里索遜1856年發(fā)現(xiàn)的，為無色晶體,，有鮮味，微溶于水,，而溶于鹽酸溶液,，等電點。大量存在于谷類蛋白質(zhì)中,，動物腦中含量也較多,。谷氨酸在生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)代謝過程中占重要地位，參與動物,、植物和微生物中的許多重要化學反應,。谷氨酸鈉俗稱味精，是重要的鮮味劑,，對香味具有增強作用,。谷氨酸鈉***用于食品調(diào)味劑，既可單獨使用,，又能與其它氨基酸等并用,。用于食品內(nèi)，有增香作用,。在食品中濃度為,，每人每天允許攝入量為0－120微克/千克(以谷氨酸計)。在食品加工中一般用量為－,。谷氨酸主要以微生物發(fā)酵制備而得,，通過優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基，使得菌體增殖速率提高,，可以提高氨基酸的產(chǎn)量?，F(xiàn)有技術對谷氨酸發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化進行了大量的研究，例如文獻1“基于pb試驗和響應面分析法對谷氨酸棒桿菌cnl021發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化,，**釀造2014年”,，通過**陡爬坡試驗和響應面分析法對發(fā)酵培養(yǎng)基組成進行優(yōu)化，得到谷氨酸棒桿菌**適發(fā)酵培養(yǎng)基組,，較未優(yōu)化培養(yǎng)基的發(fā)酵培養(yǎng)基產(chǎn)酸量提高了,。無血清培養(yǎng)基適合于需要無血清環(huán)境的細胞系。廣西培養(yǎng)基報價

    維持15-20分鐘,，可殺滅所有的繁殖體和芽胞,。本法適用于耐高溫、耐濕物品的**,，如普通培養(yǎng)基,、生理鹽水,、手術敷料等。（二）下向主要介紹高壓蒸氣**器**效果的驗證方法高壓蒸氣**器使物品**后達到無菌要求,，這是**實驗中的基本保證,。高壓**器**效果是否合格足實驗成敗的**基礎**關鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,，不需高壓**外,，大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓**15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基**不徹底,，直接關系到對**的無菌試驗結果,。因此必須認真對高壓**器進行**效果的驗證。為此我們提供了進行**效果驗證的一個簡易可行的方法,。1．試驗材料(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片,。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillusstearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5CFU/片,。(2)121℃壓力蒸氣**化學指示卡,。(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓**20分鐘后備用。(4)O—150℃留點溫度計,。2．方法與結果將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片（以下簡稱菌片）用無菌鑷子放人密封試管中,。化學指示卡和留點溫度計放入敞口試管中,。以上兩種試管各準備5-10份,。分別放置在高壓**器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處,。如**器為二層,，則需放10處。貴州DMEM/F12培養(yǎng)基采購RPMI1640培養(yǎng)基確保了細胞的高效生長,。

    無血清培養(yǎng)基,，一般是在合成培養(yǎng)基的基礎上，加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,，達到既能滿足動物細胞培養(yǎng)的要求,，又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。無血清培養(yǎng)基中通常需要添加一些額外的組分,，才能幫助細胞貼壁生長,，包括以下幾大類物質(zhì)：1）促貼壁物質(zhì)：一般為細胞外基質(zhì)，如纖連蛋白,、層粘連蛋白等,。它們還是重要的分裂素以及維持正常細胞功能的分化因子，對許多細胞的繁殖和分化，起著重要作用,。纖連蛋白主要促進來自中胚層細胞的貼壁與分化,，這些細胞包括成纖維細胞、肉*細胞,、粒細胞,、腎上皮細胞、腎上腺皮質(zhì)細胞,、CHO細胞,、成肌細胞等。2）促生長因子及***：針對不同細胞添加不同的生長因子,。***也是刺激細胞生長、維持細胞功能的重要物質(zhì),，有些***是許多細胞必不可少的,，如胰島素。3）酶**劑：培養(yǎng)貼壁生長的細胞,，需要用胰酶消化傳代,，在無血清培養(yǎng)基中需含酶**劑，以終止酶的消化作用,，達到保護細胞的目的,。**常用的是大豆胰酶**劑。4）結合蛋白和轉(zhuǎn)運蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白,。牛血清白蛋白的添加量比較大,，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護細胞免受機械損傷,。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白,。

    在s3中，將s2中消毒的外植體接入誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng),，誘導培養(yǎng)基的配方為ms+,，誘導培養(yǎng)基的ph值為，在s4中,，將s3中的無菌外植體轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基中,，增殖培養(yǎng)基的配方為ms+～～，增殖培養(yǎng)基的ph值為,，在s5中,，將s4中的繡球組培苗放入生根培養(yǎng)基中，生根培養(yǎng)基的配方為1/2ms+～～,，生根培養(yǎng)基ph值為,。通過采用上述技術方案，通過液體**培養(yǎng)技術，以芽為原材料,，獲取方便,，增殖倍率高達8～10倍，生根率達到95％以上,，苗木規(guī)格整齊,，性狀保持穩(wěn)定，同時節(jié)省成本,，適合工廠化大規(guī)模生產(chǎn)質(zhì)量繡球種苗,。誘導培養(yǎng)基萌芽率能達到90％，可以成功建立無菌再生體系,。使用本增殖培養(yǎng)基,，繡球組培苗增殖倍率能夠達到8～10倍，組培苗高度一致,，生長健壯,。使用本生根培養(yǎng)基，繡球組培苗生根率能夠達到95％,，根系發(fā)達,，健壯，可以成功用于移栽大棚,。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為：在s3中,，將s2中消毒的外植體接入誘導培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下，溫度25℃,，光照時間16h,；黑暗條件下，溫度23℃,，光照時間8h,，培養(yǎng)6～8周。通過采用上述技術方案,，在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免誘導培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應激反應,，植物材料能夠快速適應誘導培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基提供了純凈的細胞培養(yǎng)環(huán)境,。

    無芽孢：E=209—250*103J/mol,。顯然，（5）式的比值〉1,，說明提高溫度對于第二個平行反應,，即菌體死亡的反應是有利的。提高溫度,，雖然兩個平行性反應的反應速度常數(shù)都提高了,，但是，達到同樣的**效果，所需要的時間卻縮短了,，由于***個反應也就是營養(yǎng)成分破壞的反應速度常速增加的少,，因此，有利于減少培養(yǎng)基在**過程中營養(yǎng)成分的破壞,。換言之,，高溫短時**對于培養(yǎng)基營養(yǎng)成分是有利的。通常所說的高溫短時**可以提高生產(chǎn)效益,，其理論根據(jù)就在于此,。結論1：當**溫度上升時，微生物殺死速率的提高要超過培養(yǎng)基成分的破壞速率的增加,。要減少營養(yǎng)成分的破壞,，可升高溫度**。結論2：在**時選擇較高的溫度,、較短的時間,，這樣便既可達到需要的**程度，同時又可減少營養(yǎng)物質(zhì)的損失,。（二）、影響**效果的因素（1）微生物種類：不同的微生物k值不同,。（2）初始菌量：在保持N值不變的前提下,，t與初始菌量N0的對數(shù)成正比。（3）培養(yǎng)基成份：油脂,、蛋白質(zhì)增加微生物的耐熱性,。(4)傳熱與混合狀況：影響受熱均勻度。(5)培養(yǎng)基中固體顆粒的存在影響熱穿透,。(6)蒸汽中空氣的存在降低蒸汽分壓和**溫度,。(7)pH：酸性pH下可加快微生物熱死速率三、培養(yǎng)基的工業(yè)**,。RPMI1640培養(yǎng)基能夠提高細胞的存活率,。福建RPMI1640培養(yǎng)基價格對比

F12培養(yǎng)基在細胞分化研究中表現(xiàn)優(yōu)越。廣西培養(yǎng)基報價

    將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導實驗,；b,、**消毒：于無菌環(huán)境下，將挑選的種子置于無菌三角瓶中,，用無菌水清洗3-5次,，75％酒精搖動清洗5min，無菌水清洗3-5次,，5％naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s),，清水洗3-5次，種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去。(2)配制誘導培養(yǎng)基：cs基本培養(yǎng)基+,，用超純水溶解,，。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示,。(3)愈傷**的誘導方法：用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導培養(yǎng)基,，胚貼于培養(yǎng)基表面；于溫度24-26℃,、濕度50-70％,、光照強度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h,、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng),。(4)cs誘導培養(yǎng)基的誘導結果為：水稻成熟胚愈傷**誘導時，經(jīng)cs誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結構致密的團狀愈傷**,，出愈率為100％,。如圖7所示。對比培養(yǎng)例7：將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,，其余完全同培養(yǎng)實例7,，ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導培養(yǎng)基的誘導結果為：水稻成熟胚愈傷**誘導時,，經(jīng)ms誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結構致密的團狀愈傷**,，出愈率為100％。如圖7所示,。廣西培養(yǎng)基報價