胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶,，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵,，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵,。胰蛋白酶可以從牛,、豬等哺乳動物的胰臟提取，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑,。牛的胰蛋白酶有223個氨基酸,，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。胰蛋白酶溶于水,，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機溶劑,。胰蛋白酶的等電點pH值為10.1,，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時不可逆失活,。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護和***作用,。[1]胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。山東EDTA胰酶牌子

胰酶和雙抗怎么保存,？

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雙抗的保存:雙抗通常情況下在-20°C保存一年,。由于該試劑在4°C下長期存放是不穩(wěn)定的,，分裝后在-20°C下避光保存。青霉素在2-8°C存放時間不應(yīng)超過4天,，鏈霉素相對穩(wěn)定一點,，在2-8°C可以存放30天左右。雙抗從凍融后基本成分已開始降解,。胰酶的保存：胰酶可在-20°C下保存一年,。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存,，在使用前從-20°C冰箱取出。盡量避免在4C長期保存,。 山東EDTA胰酶牌子胰酶在PH值7.2-8.0的時候,，溶液呈淡紅色。

細胞傳代消化時所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法,、離子螯合劑,、物理法和冷凍法。其中**常用的是酶消化法,。酶消化法：貼壁干細胞酶消化傳代時通常采用兩種方式：1,、加入胰酶等干細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用,，離心傳代,；2,、加入胰酶后，鏡下觀察待干細胞開始脫落時,，棄去胰酶,，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩,，而后者有可能對干細胞施加胰酶選擇,，因為總是貼壁不牢的干細胞先脫落。

胰酶操作步驟：

(*供參考) ：1. 吸取培養(yǎng)基,，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,，以除去殘余的血清,。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液，略蓋過細胞即可,。根據(jù)細胞的特性可以增加或減少胰酶用量,，室溫放置30秒至2分鐘。（不同的細胞消化時間有所不同）3. 顯微鏡下觀察,，細胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用***吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,。4. 此時吸除胰酶細胞消化液,。加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞,，即可直接用于后續(xù)實驗,。如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化,。 胰酶細胞消化液和胰蛋白酶消化液是一樣的嗎,？

    只斷裂賴氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵,。白色或米黃色結(jié)晶性粉末,。溶于水,，不溶于乙醇,、甘油、氯仿和**,。分子量24000,，pI,，**適pH值～,。pH>,。Ca2+對酶活性有穩(wěn)定作用；重金屬離子,、有機磷化合物、DFP,、天然胰蛋白酶**劑對其活性有強烈**。臨床用于抗消腫,，工業(yè)上用于皮革制造,、生絲處理、食品加工等,。胰蛋白酶*典標準胰蛋白酶來源含量本品系自豬,、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計算,，每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位,。胰蛋白酶制法要求本品應(yīng)從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,，生產(chǎn)過程應(yīng)符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求,。胰蛋白酶性狀本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末。胰蛋白酶鑒別取本品約2mg,，置白色點滴板上，加對甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽試液,，即顯紫色。胰蛋白酶檢查酸度取本品,，加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液，依法測定（2010年版*典二部附錄ⅥH）,，pH值應(yīng)為～。溶液的澄清度取本品,，加,，依法檢查（2010年版*典二部附錄ⅨB）,，溶液應(yīng)澄清,。糜蛋白酶-底物溶液的制備取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯，置100ml量瓶中,，加磷酸鹽緩沖液（取,，混合，pH值為）50ml,，溫熱使溶解，冷卻后再稀釋至刻度,，搖勻。胰蛋白酶是一種異源蛋白酶,，與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細胞膜上的蛋白質(zhì)。浙江國產(chǎn)胰酶常用知識

胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。山東EDTA胰酶牌子

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶,。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)干細胞種類,、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等,。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細胞,，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了,。終止是用血清。主要作用于干細胞間,。配制時不能用含鈣,、鎂的平衡液，否則影響活性,。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的,，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下干細胞,。這種方法作用溫和，對干細胞損傷較小,，但是，價格也較貴,。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細胞的消化的關(guān)鍵因素之一,，如果配的比較標準，消化的時候就容易消化,，反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下,，如果干細胞下來的比較多了，這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳,。營養(yǎng)液中有血清,，胰酶遇到血清就會自動終止消化，但這樣操作對干細胞是有一定的影響的,。對于容易消化的干細胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s）,，棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細胞消化的難易程度）,，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細胞消化單細胞,。山東EDTA胰酶牌子